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Méthodes de recherche sur le système immunitaire

Méthodes d'évaluation subjective et objective du système immunitaire.

Statut immunitaire, principes et niveaux d'évaluation.

Il est important de comprendre que la correction des processus immunopathologiques due aux différences dans les mécanismes de leur développement ne peut pas être la même et doit être précédée de méthodes de recherche sur le système immunitaire qui permettent la détermination la plus précise de la variante du processus immunopathologique.

Pour établir la nature des changements immunopathologiques, des méthodes spéciales de diagnostic du système immunitaire sont nécessaires. Ces méthodes sont réalisées dans le cadre d'une section spéciale de l'immunologie, à savoir dans le cadre de l'immunodiagnostic. L'immunodiagnostic est un domaine en développement, il est constamment mis à jour, les méthodes obsolètes sont remplacées par des technologies et des techniques plus avancées. Les méthodes d'immunodiagnostic sont utilisées non seulement pour étudier le système immunitaire, les maladies infectieuses, mais aussi pour le diagnostic des processus oncologiques, des maladies du système endocrinien et bien d'autres. Cela est dû en partie à l'implication du système immunitaire dans des maladies d'étiologies et de pathogenèse diverses dans le cadre de l'unité de la régulation neuro-immuno-endocrine de l'homéostasie, en partie à cause de l'utilisation d'approches immunologiques dans la fabrication de réactifs, de systèmes de test pour l'étude de presque toutes les molécules et cellules.

Toutes les méthodes de diagnostic de l'état du système immunitaire peuvent être divisées en plusieurs groupes. Certaines méthodes sont réalisées par un clinicien, d'autres par des spécialistes du diagnostic instrumental et d'autres par des spécialistes de laboratoire. En raison de la variété des méthodes utilisées, le diagnostic de l'état du système immunitaire est effectué à plusieurs niveaux.

Le 1er niveau est indicatif et vise à vérifier la présence de la probabilité de dysfonctionnement du système immunitaire. Ce niveau est clinique, il consiste à recueillir les antécédents médicaux du patient, à étudier ses plaintes et à établir des marqueurs cliniques de la fonction du système immunitaire altérée par un examen physique. En règle générale, un dysfonctionnement du système immunitaire peut être suspecté si le patient présente des infections respiratoires fréquentes (plus de 4 fois par an) et prolongées qui se produisent sans réaction de température, avec une condition subfébrile prolongée, une diminution ou une augmentation significative du poids corporel, la présence de maladies de la peau pustuleuse, des signes allergies, en violation du fonctionnement du tractus gastro-intestinal, une augmentation des ganglions lymphatiques régionaux, etc.

Lors d'un examen physique, le médecin attire l'attention sur l'état de la peau, des cheveux et des ongles, l'état des muqueuses de la cavité buccale, la taille et la texture des ganglions lymphatiques régionaux et la rate. Selon les résultats de cet examen, il est possible de supposer un changement dans la fonction du système immunitaire et de poursuivre délibérément le diagnostic de son état.

Le 2e niveau de diagnostic est déterminant. Il n'est pas toujours utilisé, car ses capacités sont axées sur la visualisation de divers organes internes, y compris les organes du système immunitaire. Les méthodes de diagnostic instrumental comprennent les rayons X, les ultrasons et les méthodes connexes. Leur valeur diagnostique est associée à la détection de formations volumétriques ou de modifications de la taille de l'organe, qui accompagne le plus souvent les processus tumoraux (les processus lymphoprolifératifs font partie de la pathologie du système immunitaire).

Le 3ème niveau de diagnostic est le laboratoire. C'est ce niveau qui vous permet d'obtenir un maximum d'informations sur le fonctionnement des molécules et des cellules du système immunitaire, ce qui est extrêmement important pour diagnostiquer la pathologie du système immunitaire ou déterminer son implication dans le processus pathologique.

Pour les tests de laboratoire, le sang est le plus souvent utilisé, il est possible et souhaitable d'utiliser la salive, le liquide céphalorachidien, le liquide synovial, l'urine (vous pouvez déterminer le niveau de certaines cytokines), ainsi que les matériaux obtenus par biopsie des ganglions lymphatiques régionaux, de la moelle osseuse rouge.

En principe, tous les matériaux répertoriés peuvent être divisés en 2 groupes - le premier - les matériaux universels qui sont examinés chez chaque patient présentant une violation présumée de la fonction du système immunitaire (sang périphérique),

2e - matériaux spécialisés étudiés dans des cas individuels et, en règle générale, représentant du matériel au centre du processus pathologique.

Le sang périphérique, en tant que matériau biologique pour la recherche, est remarquable pour sa prise, mais présente un certain nombre de limites en termes de fiabilité et de valeur diagnostique des informations reçues. Le système circulatoire n'est qu'un des systèmes de transit des lymphocytes. Dans la circulation sanguine, il n'y a pas plus de 0,5% de tous les lymphocytes dans le corps et leur étude n'est pas toujours autorisée à obtenir des informations sur l'état du système immunitaire, car la plupart de l'activation physiologique et pathologique de ces cellules est effectuée sur le territoire des organes du système immunitaire ou de divers tissus. Par conséquent, le niveau de signification des informations reçues est différent pour différentes conditions pathologiques, et un complexe de méthodes est nécessaire pour obtenir des informations fiables sur l'état du système immunitaire.

Parmi les méthodes de laboratoire utilisées pour l'immunodiagnostic, une place particulière est occupée par:

1) des méthodes basées sur la détection de cellules et de molécules du système immunitaire à l'aide d'anticorps monoclonaux marqués (MAT). La base de ces méthodes est la production d'anticorps monoclonaux dirigés contre des molécules spécifiques en utilisant la technologie des hybridomes. Les anticorps monoclonaux résultants sont marqués avec un fluorochrome, un isotope radioactif ou une autre méthode et, en utilisant la propriété principale des anticorps - la capacité de se lier à un antigène, les molécules étudiées sont détectées sur des cellules individuelles, des échantillons de tissus de biopsie ou dans d'autres matériaux. Pour détecter la liaison de la molécule étudiée au MAT, un équipement spécial est nécessaire: si le MAT est marqué avec un fluorochrome, les résultats sont enregistrés à l'aide d'un microscope luminescent, mais plus efficacement à l'aide d'un cytofluorimètre à flux laser. Si le MAT est marqué avec un isotope radioactif, les résultats sont enregistrés en utilisant des compteurs de rayonnement ionisant ou en utilisant une autoradiographie. La méthode d'immunodosage enzymatique, la méthode de microscopie immunoélectronique, l'immunocytochimie et l'immunohistochimie appartiennent également à ce groupe de méthodes. L'introduction de ce groupe de méthodes a permis à l'immunophénotypage de déterminer si les cellules du système immunitaire appartiennent à une sous-population particulière, ainsi que la détermination qualitative et quantitative de pratiquement n'importe quelle molécule de protéine et haptènes.
Par conséquent, la portée de ce groupe de méthodes a largement dépassé les limites de l'immunodiagnostic et même de la médecine;

2) méthode sérologique. Cette méthode est également utilisée sur la base d'une interaction antigène-anticorps, mais dans le cas d'une interaction visuellement détectable. C'est-à-dire dans les cas où l'interaction de l'antigène avec l'anticorps passe à la fois par une phase spécifique et une phase non spécifique, formant un complexe macromoléculaire visible sous forme d'agglutinats ou de précipités (voir la conférence Antibody). Cette méthode est principalement utilisée pour diagnostiquer certaines maladies infectieuses (pour déterminer le niveau d'anticorps spécifiques à un antigène ou d'antigènes pathogènes), pour déterminer les groupes sanguins, ainsi que pour déterminer la protéine C-réactive et certaines autres protéines pro-inflammatoires qui circulent dans la circulation sanguine à une concentration assez élevée. La méthode sérologique est simple, ne nécessite pas d'équipement spécial, mais est inférieure au groupe de méthodes précédent en termes de précision, de reproductibilité, de spécificité et de résolution, elle perd donc progressivement son importance;

3) méthodes génétiques moléculaires (amplification en chaîne par polymérase - PCR, hybridation moléculaire à l'aide d'ADN, sondes d'ARN, réaction de séquençage). La base de ces méthodes est l'étude des gènes individuels, la détection des mutations. Les méthodes de génétique moléculaire sont utilisées pour confirmer les immunodéficiences primaires (congénitales), pour déterminer l'haplotype du principal complexe d'histocompatibilité en identifiant le risque de développer des processus auto-immunes, pour détecter les micro-organismes dans le matériel biologique, etc.

4) méthodes culturelles et biologiques. Il s'agit également d'un large groupe de méthodes impliquant l'utilisation de cellules animales (érythrocytes de mouton par exemple), les microorganismes comme réactifs auxiliaires (les staphylocoques, le candida sont souvent utilisés pour déterminer l'activité phagocytaire). De plus, dans le processus de recherche, la culture de cellules du système immunitaire en laboratoire est utilisée. Habituellement, ce groupe de méthodes est utilisé pour évaluer l'activité fonctionnelle des cellules du système immunitaire.

Les méthodes énumérées dans le mode habituel d'immunodiagnostic sont utilisées pour déterminer le statut immunitaire d'une personne. Le statut immunitaire est l'état du système immunitaire dans une période de temps spécifique. Historiquement, un système à 2 niveaux pour évaluer le statut immunitaire s'est développé (voir atelier de laboratoire sur l'immunologie pour les étudiants de 3e année, travaux de laboratoire n ° 8, p. 44). Au 1er niveau, les tests les plus simples sont utilisés pour détecter des changements prononcés dans les indicateurs. Le niveau 2 implique l'utilisation de méthodes et de tests plus avancés, vous permettant d'obtenir des informations plus complètes sur l'état du système immunitaire. Cependant, à l'heure actuelle, cette approche est également progressivement supplantée par la pratique. Cela est dû au développement de technologies plus avancées, ainsi qu'à l'avancement de l'étude des principes fondamentaux du développement de la pathologie du système immunitaire. Ainsi, pour étudier le statut immunitaire, l'approche immunopathogénétique est de plus en plus utilisée, lorsque les résultats de la recherche clinique et des tests de laboratoire clinique sont davantage pris en compte et que les plus indicatifs et spécifiques sont sélectionnés dans l'ensemble du spectre des tests immunodiagnostiques:

• pour le diagnostic des états d'immunodéficience après un premier examen clinique, une étude complète de l'état immunitaire est réalisée (voir atelier de laboratoire en immunologie pour les étudiants de 3e année, travaux de laboratoire n ° 8). En cas de suspicion d'immunodéficience primaire (congénitale), le diagnostic est confirmé par la recherche en génétique moléculaire visant à détecter des mutations ou l'absence de gènes spécifiques. Dans le cas d'immunodéficiences secondaires d'origine infectieuse, le diagnostic est confirmé par la détection d'un agent infectieux (généralement par PCR ou par détection d'antigènes pathogènes et d'anticorps dirigés contre eux à l'aide de méthodes immunochimiques ou sérologiques);

• pour le diagnostic des processus lymphoprolifératifs, les méthodes instrumentales sont largement utilisées pour visualiser la formation volumétrique (tumeur) du système lymphatique, étudier le phénotype immunologique des lymphocytes sanguins, des cellules de la moelle osseuse rouge et / ou de la biopsie de la tumeur détectée. Le phénotypage des cellules permet d'établir le stade de leur différenciation. Le diagnostic comprend également l'analyse chromosomique et les études de génétique moléculaire des marqueurs d'un certain nombre de tumeurs des systèmes lymphatique et hématopoïétique, ainsi que des produits sécrétés par certains types de tumeurs (par exemple, les chaînes légères des immunoglobulines) en utilisant diverses variantes de méthodes immunochimiques. Les indicateurs de l'état immunitaire dans ce cas n'ont pas de valeur diagnostique particulière pour confirmer le diagnostic du processus lymphoprolifératif, mais sont nécessaires pour comprendre le fonctionnement de tous les composants du système immunitaire dans des conditions de maladie lymphoproliférative;

• pour le diagnostic des allergies, la spécificité du principal facteur pathogénique, les IgE, est déterminée, grâce à laquelle il est établi quelle substance est l'allergène du patient. Pour établir les caractéristiques de la pathogenèse des allergies, la concentration en matières biologiques (sang, salive, urine, liquide lacrymal, sécrétion nasale, etc.) des composants biologiquement actifs des mastocytes (histamine, tryptase, chymotriptase, etc.) est déterminée. La valeur diagnostique est également une étude de la production d'interleukine-4 et de plusieurs autres indicateurs. Les indicateurs du statut immunitaire sont des critères auxiliaires, en règle générale, ils ne sont pas directement liés aux allergies;

• pour le diagnostic des maladies auto-immunes, il est pathogéniquement important de déterminer des auto-anticorps de spécificités spécifiques (par la méthode immunochimique ou sérologique), ainsi que le niveau général des immunoglobulines de différentes classes, la concentration de CEC, déterminer l'activité du système du complément, la concentration des protéines pro-inflammatoires (protéine C-réactive, céruloplasmine, facteur rhumatoïde, etc.). ) Dans le diagnostic des maladies auto-immunes, des études de biopsie tissulaire sont utilisées dans lesquelles la présence de complexes immuns fixes ou de leurs composants est déterminée. La détermination d'autres paramètres de l'état immunitaire n'est pas critique dans le diagnostic des processus auto-immunes.

Les résultats des études immunodiagnostiques sont ensuite utilisés pour établir la forme nosologique de la maladie et prescrire un traitement. Dans le traitement des processus immunopathologiques, la thérapie immunocorrective, ou immunocorrection, occupe une grande place.
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Méthodes de recherche sur le système immunitaire

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