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Échantillonnage et prétraitement des échantillons de sol pour analyse

Inspection sanitaire, sélection des points d'échantillonnage

Les principaux objets, dont les territoires sont soumis au contrôle des organismes d'inspection sanitaire utilisant des méthodes de recherche microbiologique sanitaire qui nécessitent un certain nombre de mesures pour prévenir la pollution des sols, sont: les institutions pédiatriques et médicales; les zones rurales et non canalisées des établissements urbains; le territoire de la première zone de la zone de protection sanitaire des sources d'approvisionnement en eau potable; zones d'enfouissement; sites de décharge; champs agricoles irrigués avec de l'eau de réservoirs ouverts, ruissellement de fermes d'élevage; champs d'irrigation agricole par les eaux usées urbaines et industrielles.

Une étape préliminaire obligatoire dans l'étude sanitaire et bactériologique est un examen sanitaire et la compilation d'un passeport de la zone étudiée avec un coupon d'accompagnement.

Passeport de la zone enquêtée:

1. Numéro de tracé.

2. L'adresse du site et son lien avec la source de pollution.

3. Date de l'examen.

4. La taille de l'intrigue.

5. Nom du sol.

6. Le soulagement.

7. Le niveau des eaux souterraines.

8. Le couvert végétal du territoire.

9. Caractérisation de la source de pollution (nature de la production, matières premières utilisées, capacité de production, volume d'émissions de gaz et de poussières, déchets liquides et solides, évacuation des bâtiments résidentiels, terrains de jeux, lieux de prise d'eau, etc.).

10. La nature de l'utilisation du site (aire de jeux, entreprise, etc.).

11. Informations sur l'utilisation du site au cours des années précédentes (remise en état, utilisation de produits chimiques, etc.). Entrepreneur, poste. Signature personnelle. Décryptage des signatures

Le pass d'accompagnement contient les données suivantes:

1. Date et heure de l'échantillonnage.

2. Adresse.

3. Numéro de terrain.

4. Le numéro du site de test,

5. Numéro de l'échantillon combiné, horizon (couche), profondeur d'échantillonnage.

6. La nature des conditions météorologiques le jour de l'échantillonnage.

7. Caractéristiques trouvées lors de l'échantillonnage (exposition au soleil, utilisation de produits chimiques, présence de décharges, installations de traitement, etc.).

8. Autres fonctionnalités.

Vous trouverez ci-dessous la signature du médecin ou du médecin hygiéniste adjoint qui a effectué l'examen sanitaire du terrain.

Sur la base des résultats de l'inspection sanitaire du territoire et de sa description, un plan schématique du terrain est établi avec l'application des sources de pollution. Cela vous permet de justifier correctement le choix des points d'échantillonnage du sol.

Dans la zone d'étude, s'il existe une source de pollution, deux parcelles de 25 m2 chacune sont distinguées: l'une à proximité de la source de pollution (expérimentale), l'autre au loin (contrôle). Le témoin est choisi de manière à ce qu'il soit manifestement non pollué et ait la même composition de sol que l'expérimenté.

Échantillonnage des sols

Des échantillons de sol sont prélevés sur chacun des sites en ses cinq points en diagonale ou le long de "l'enveloppe" (quatre points dans les coins et un au centre).

Si les chercheurs s'intéressent aux conséquences de l'application directe d'une substance chimique dans le sol, des échantillons sont prélevés superficiellement (0-1 cm) avec un instrument stérile (couteau, spatule) à raison de 0,3-0,5 kg à un moment donné.

Si nous étudions l'effet d'un produit chimique sur la microflore de l'horizon du sol, la méthodologie suivante est utilisée pour échantillonner les sols. Chaque point de prélèvement d'échantillons de sol représente le centre de 1 m2 du territoire sélectionné pour la recherche. Ici, une fosse est creusée avec une taille de 0,3 x 0,3 m et une profondeur de 0,2 m. La surface de l'une des parois de la fosse est nettoyée avec un couteau stérile. Ensuite, un échantillon de sol est coupé de ce mur, dont la taille est déterminée par un échantillon donné. Ainsi, s'il est nécessaire de prélever 200 g de terre, la taille de l'échantillon est de 20 cm x 3 cm x 3 cm; 500 g - 20 cm x 5 cm x 30 cm.

Lors de l'étude des effets des pesticides et autres produits chimiques sur la microflore et les processus d'auto-nettoyage dans les couches de sol plus profondes, des fosses d'une profondeur de 1 m sont utilisées pour prélever des échantillons de sol. Des échantillons sont prélevés de la paroi de la fosse avec un instrument stérile tous les 10 cm.

Les échantillons sélectionnés sont placés dans des boîtes stériles et livrés au laboratoire. S'il n'est pas possible de commencer immédiatement la recherche sur le sol, il est autorisé de conserver l'échantillon à une température de 4 à 5 ° C, mais pas plus de 24 heures.

Préparation et travail du sol pour l'analyse

Pour préparer un échantillon moyen de 0,5 kg, le sol de tous les échantillons d'une section est versé sur une feuille de papier dense stérile, soigneusement mélangé avec une spatule stérile, des pierres et d'autres objets solides sont jetés. Ensuite, le sol est réparti en place avec une couche encore mince en forme de carré.

En diagonale, le sol est divisé en 4 triangles. Le sol de deux triangles opposés est jeté, et le reste est à nouveau mélangé, à nouveau distribué en couche mince et divisé par des diagonales, et ainsi de suite, jusqu'à ce qu'il reste environ 0,5 kg.

Avant le semis, le sol est dispersé, c'est-à-dire le sol, soumis à des conditions de stérilité, est tamisé à travers un tamis d'un diamètre de 3 mm. Lors du tamisage, le tamis supérieur est recouvert de papier stérile.

Pour tenir compte des micro-organismes du sol et des entérovirus, un échantillon de 1 à 10 g est suffisant, pour les micro-organismes sanitaires-indicatifs de 1 à 30 g, pour les entérobactéries pathogènes (50-50,5 g). La première dilution de l'échantillon de sol (1: 10) est effectuée dans un récipient stérile, en ajoutant de l'eau du robinet stérile dans un rapport de 1: 10 au poids du sol (par exemple: 1 g d'eau, 10 g de sol dans 100 ml d'eau, etc.).

Ensuite, une culture préliminaire du sol est effectuée, dont le but est d'extraire les cellules de micro-organismes des agrégats du sol.

Les principales méthodes de travail du sol sont les suivantes:

1) Agitation verticale de 10 minutes de la suspension de sol de la première dilution dans des tubes à essai avec des bouchons en caoutchouc - avec un échantillon de sol 1 g;

2) Traitement de 3 minutes de la suspension de terre sur un agitateur mécanique.

Une suspension de sol contenant 1 ml de 0,1 g de sol, 30 secondes après le prétraitement (pendant ce temps, les particules minérales grossières se déposent) est utilisée pour préparer des concentrations de sol décroissantes successivement. Pour cela, 1 ml est prélevé d'une première dilution dans un flacon avec une teneur en terre de 0,1 g ml à l'aide d'une pipette stérile et transféré dans un tube à essai avec 9 ml d'eau du robinet stérile. Dans ce cas, une deuxième dilution est obtenue contenant 0,01 gml de terre. En répétant cette opération, amenez la culture du sol à 0,0001-0,00001 gml.

Les dilutions préparées sont utilisées pour l'ensemencement sur divers milieux nutritifs afin de déterminer les paramètres microbiologiques.

Examen sanitaire et bactériologique du sol

Les méthodes de détermination des indicateurs microbiologiques caractérisant la contamination fécale du sol sont les suivantes:

1. Détermination du nombre de bactéries du groupe d'Escherichia coli, entérocoques, entérovirus.

2. Détermination d'Escherichia coli dans le sol par la méthode de titrage.

3. Détermination d'Escherichia coli dans le sol par la méthode des filtres à membrane.

4. Ensemencement direct en surface sur des milieux nutritifs agarisés pour tenir compte d'E. Coli dans le sol.

5. Détermination du nombre total de bactéries dans le sol,

6.
Détermination de Clostridium perfringens dans le sol.

7. Détermination des bactéries thermophiles.

8. Détermination des bactéries nitrifiantes dans le sol.

Les méthodes pour déterminer les micro-organismes qui caractérisent la pollution des sols et l'auto-nettoyage de la pollution organique et chimique comprennent:

1. Détermination du nombre total de micro-organismes saprophytes du sol.

2. Détermination du nombre total de micro-organismes du sol par microscopie directe.

3. Détermination du nombre total et du pourcentage de bacilles du sol.

4. Détermination du nombre de champignons et d'actinomycètes dans le sol.

5. Détermination des micro-organismes aérobies dégradant la cellulose.

6. Détermination des ammonifiants dans le sol.

7. Détermination de la toxicité du sol pour les micro-organismes.

Les méthodes de détermination des bactéries et virus pathogènes dans le sol sont les suivantes:

1. Détermination des salmonelles dans le sol.

2. Indication et isolement des clostridies pathogènes du sol.

3. Identification et isolement du bacille tétanique.

4. Indication et affectation du bacille botulique.

5. Détection du bacille du charbon dans le sol.

6. Examen sanitaire et virologique du sol.

Les principales méthodes de détermination des indicateurs microbiologiques caractérisant la contamination des sols fécaux

Détermination d'Escherichia coli dans le sol par titre

Dès la première dilution de la suspension de sol (1: 10), 10 ml sont prélevés et ensemencés en flacons avec 50 ml de milieu liquide (bouillon Kesler ou lactose avec chlorure de triphényltétrazolium TTX). En semant de plus petites quantités (0,1 g, 0,01 git), faire 1 ml des dilutions appropriées de la suspension de sol dans des tubes à essai avec 9 ml du même milieu.

Avant l'inoculation, 0,3 ml d'une solution aqueuse de TTX à 2% est ajouté à chaque tube avec du bouillon de lactose et 1,5 ml à chaque flacon. La technique utilisant le TTX est basée sur la capacité d'Escherichia coli à restaurer le composé incolore du TTX avec le triphénylformazane, qui précipite et donne au milieu une couleur rouge brunâtre. Escherichia coli est résistante au formazan, tandis que le développement d'autres microflores est inhibé.

Les cultures sur milieu Kessler sont cultivées 48 heures à 43 ° C ou 37 ° C. L'absence de formation de gaz et de turbidité dans les cuves de fermentation après 48 heures donne une réponse négative définitive à la présence de bactéries coliformes. Une réponse négative sur le bouillon de lactose avec TTX est donnée après 24 heures dans le cas où la couleur du milieu dans les tubes et les flacons n'a pas changé.

En présence de formation de gaz et de turbidité dans des récipients contenant du milieu de Kessler, ou seulement de la turbidité, l'ensemencement sur le milieu Endo est effectué. Les coupelles avec des récoltes sont placées dans un thermostat pendant 24 heures à une température de 37 ° C.

Le manque de croissance sur les tasses donne une réponse négative définitive.

S'il y a des colonies roses ou rouges de bâtonnets gram-négatifs avec une activité oxydase négative à la surface du milieu Endo, ils sont comptés et attribués aux bactéries du groupe d'E. Coli après confirmation de la fermentation du glucose. Pour cela, 2-3 colonies de chaque type sont ensemencées dans un milieu semi-liquide avec du glucose. La comptabilité est effectuée après 4-5 et 18 heures d'incubation à 37 ° C. Si de l'acide et du gaz se forment dans le milieu pendant cette période, cela confirme la présence d'Escherichia coli dans la dilution étudiée du sol. Les résultats de l'analyse sont exprimés par titre de coli.

Détermination du nombre total de bactéries dans le sol

Pour caractériser la contamination microbienne totale d'origine fécale dans le sol, le nombre de micro-organismes, principalement des bactéries, caractéristiques de la viande et de la gélose peptone à 37 ° C, est utilisé. En même temps, des dilutions de sol sont semées dans 1,5% de viande et de gélose à la peptone. À partir de chaque échantillon de sol à semer, au moins deux dilutions différentes doivent être utilisées. Prendre 1 ml de suspension et transférer au fond d'une tasse stérile. A partir de chaque dilution, au moins 2 plaques parallèles sont ensemencées. Après cela, de la gélose nutritive pré-fondue et refroidie à 45 ° C dans une quantité de 15 à 20 ml est versée dans chaque tasse. Les boîtes de Pétri d'agar fondu se mélangent bien avec la suspension de terre. Ensuite, les tasses sont placées sur une surface strictement horizontale jusqu'à ce que le milieu se solidifie.

Après la solidification de la gélose, les coupes inversées sont ensemencées dans un thermostat à 37 ° C pendant 24 heures.

Après incubation, les colonies cultivées sont comptées.

Détermination du nombre total de bactéries dans le sol

Pour caractériser la contamination microbienne totale d'origine fécale dans le sol, le nombre de micro-organismes, principalement des bactéries poussant sur de la viande et de la gélose peptone à 37 ° C, est utilisé. En même temps, des dilutions de sol sont semées dans 1,5% de viande et de gélose à la peptone. À partir de chaque échantillon de sol, au moins deux dilutions différentes doivent être utilisées pour le semis. Après un mélange complet, prendre 1 ml de suspension et transférer au fond de deux boîtes de Pétri stériles. De la gélose nutritive dans une quantité de 15-20 ml de liquide fondu et refroidi à 45 ° C est versée dans chaque tasse. Ensuite, les tasses sont placées sur une surface strictement horizontale jusqu'à ce que le milieu se solidifie.

Après incubation à 37 ° C pendant 24 heures, les colonies cultivées sont comptées.

Détermination de Clostridium perfringens dans le sol

De toutes les dilutions de sol préparées (jusqu'à 1/1 000 000), 1 ml est transféré dans deux rangées parallèles de tubes. Une rangée de tubes est chauffée à une température de 80 ° C pendant 15 minutes ou à 90 ° C pendant 10 minutes. Ensuite, 9-10 ml de milieu Wilson-Blair sont versés dans tous les tubes. L'incubation des cultures est réalisée à 37 ° C pendant 24 heures.

Cl. perfringens forment des colonies noires, en frottis - bâtonnets gram-positifs.

Détermination des bactéries nitrifiantes dans le sol

Les bactéries nitrifiantes complètent le cycle de transformation des composés azotés dans le sol, oxydant l'ammoniac en nitrites et nitrates. Par conséquent, le nombre de ces micro-organismes indique assez clairement le degré de pollution organique, le taux et la fin de la décomposition de la matière organique dans le sol.

La détermination de la nitrification peut être effectuée en semant des dilutions de suspension de sol sur des milieux solides ou liquides. Le plus souvent, l'environnement de Vinogradsky est utilisé à ces fins. Pour ce faire, semez les dilutions du sol dans des flacons avec un milieu versé en fine couche. Dans l'expérience, il est recommandé d'inclure deux flacons non infectés avec le milieu servant de contrôle de la pureté du milieu. Les cultures sont incubées à 28 ° C pendant 14 à 15 jours.

Avec le développement de bactéries nitrifiantes, des acides nitreux et nitriques se forment progressivement dans le milieu. Il est recommandé de vérifier la formation de composés d'oxyde d'azote le 5-7ème jour après le semis et de nouveau le 14-15ème jour. Le titre des bactéries nitrifiantes est le plus souvent fixé à l'aide d'un test de haute qualité avec la diphénylalanine; en présence d'acides nitreux et nitrique, ce réactif donne une couleur bleue. Pour ce faire, pipeter plusieurs gouttes de milieu de chaque flacon, sans remuer le précipité, et transférer sur une plaque de verre. Ajoutez ensuite quelques gouttes d'une solution de diphénylamine dans de l'acide sulfurique concentré. L'apparition d'une coloration bleue indique la présence de nitrates dans le milieu, du fait de la multiplication des bactéries nitrifiantes. Le milieu des flacons de contrôle ne doit pas produire de décoloration.
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Échantillonnage et prétraitement des échantillons de sol pour analyse

  1. Échantillonnage de produits culinaires pour analyse en laboratoire
    Premiers cours. Prenez deux portions de chaque article. L'un est retiré du bac au niveau de la mangeoire ou de la distribution (pour le libre-service), le second - de la chaudière après avoir mélangé son contenu. Deuxième cours. Une portion de chaque article est prélevée du plateau du chargeur ou à la distribution (pendant le service lui-même). Les échantillons de garniture et de sauce sont prélevés séparément. Les échantillons sont placés dans un endroit propre et sec
  2. Échantillonnage en laboratoire
    À partir de différents endroits de chaque emballage de transport ouvert (sélectionnés au hasard conformément à la norme), trois échantillons ponctuels sont prélevés avec le produit (un exemplaire ou une partie d'un exemplaire, ou un bloc de poisson, un filet, une paroi latérale ou une poignée de très petits poissons, ou une partie du produit) et constituer un échantillon combiné ne pesant pas plus de 3,0 kg Lors de l'échantillonnage de produits congelés sous forme de blocs de
  3. Échantillonnage, direction et préparation des échantillons pour la recherche en laboratoire
    L'échantillonnage pour la recherche bactériologique doit être effectué dans des pots stériles à col large, recouverts de papier parchemin et attachés avec de la ficelle. Les restes d'aliments en conserve sont envoyés pour la recherche directement dans le pot à partir duquel ils ont été utilisés pour la nourriture. La viande est prélevée pour analyse à raison de 500 g, tandis que l'échantillon est prélevé à divers endroits de la carcasse avec une prise obligatoire
  4. Obtention d'échantillons de sang pour analyse
    En pratique, une analyse des gaz du sang artériel est généralement effectuée, bien qu'avec des difficultés, il soit permis d'examiner le sang capillaire ou veineux. La PvO2 est normalement de 40 mm Hg CT et reflète l'extraction tissulaire de l'oxygène, mais pas la fonction pulmonaire. PvO2 est généralement de 4 à 6 mm Hg CT au-dessus de PaCO2. Par conséquent, le pH du sang veineux est inférieur de 0,05 au pH du sang artériel. Malgré ces limites, l'analyse des gaz
  5. SÉLECTION ET TRAITEMENT DES SEMENCES DE TAUREAUX, DE PETITS GRUMEURS ET DE VERRES
    Section 4.5.1. Dispositions générales Les objectifs du contrôle sanitaire officiel de la production de semences sont les suivants: 1. maintenir l'état de santé animale au centre de l'insémination artificielle à un niveau permettant la distribution des semences sur les marchés internationaux avec peu de risques de transmettre des micro-organismes pathogènes spécifiques à travers les semences à d'autres animaux ou humains;
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  7. Méthodes de traitement et d'analyse des résultats
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  8. ВІДБІР ПРОБ ОБ'ЄКТІВ ВЕТЕРИНАРНОГО КОНТРОЛЮ ДЛЯ ВИЗНАЧЕННЯ ЇХ ЗАБРУДНЕННЯ РАДІОМЕТРИЧНИМИ ТА ДОЗИМЕТРИЧНИМИ МЕТОДАМИ
    Яка особливість відбору проб об'єктів ветеринарного контролю для визначення їх забруднення радіометричними та дозиметричними методами? Відбір проб об'єктів ветеринарного контролю для визначення рівнів їх радіоактивного забруднення проводять у плановому порядку, а також у випадку підозри на забрудненість радіонуклідами вище за їх фоновий рівень. Фактор радіоактивного забруднення встановлюють
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  11. Recommandations pour effectuer des tests ECG d'effort pour l'évaluation diagnostique initiale de la classe d'angine de poitrine
    Classe I 1. Patients présentant des symptômes d'angine de poitrine et une probabilité moyenne avant le test de maladie coronarienne, en tenant compte de l'âge, du sexe et des symptômes. Une exception est l’incapacité du patient à effectuer la charge ou l’identification de changements dans l’ECG, ce qui complique l’interprétation des résultats du test. Classe IIb 1. Patients présentant une dépression du segment ST> 1 mm sur un ECG au repos ou de la digoxine. 2. Patients à faible
  12. Среды для обработки
    Среды для
  13. ПРОЧИЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ НАРУЖНОЙ ОБРАБОТКИ
    ВЕДИНОЛ Состав. Оригинальное лекарственное средство - мазь вединол содержит в качестве активного начала 3% эфирного масла сосны, силбиол, который получают из древесной зелени сосны и ели, и вспомогательные компоненты. Лечебное действие. Вединол обладает антимикотическими, противомикробными, противовоспалительными и ранозаживляющими свойствами. Применение. Вединол применяют для лечения
  14. ОБРАЗЦЫ МОЧИ
    Методы взятия образцов мочи зависят от вида анализов. Свежие образцы, собранные в чистую посуду, а не в лоток, пригодны для основных анализов – определение плотности, рН и предварительной оценки содержания белка. Для выделения бактериальных культур требуется полная стерильность. Средняя порция мочи Ее можно взять пости у всех кошек путем надавливания на мочевой пузырь через брюшную стенку.
  15. КАК ПОДГОТОВИТЬ БИОМАТЕРИАЛЫ ДЛЯ АНАЛИЗОВ
    Для определения вирусных агентов, гельминтов и их яиц, а также для исследования микрофлоры кишечника с индивидуальным подбором антибиотиков, соберите утреннюю порцию кала в чистую, прокипяченную в течение 30 минут стеклянную баночку с плотно закрывающейся или завинчивающейся крышкой, и не позднее чем через 2 часа после взятия доставьте в диагностическую ветеринарную лабораторию. Не забудьте
  16. Санитарно-паразитологические требования к почвенной доочистке и сельскохозяйственному использованию сточныхвод и их осадков
    Сточные воды, как уже было отмечено, могут содержать патогенные микроорганизмы, вирусы, простейшие и яйца гельминтов. К самым распространенным бактериям относятся сальмонеллы, энтеропатогенные эшерихии и микобактерии. Часто обнаруживаются в сточных водах цисты дизентерийных амеб, лямблий, яйца аскарид, власоглавов, тениид, анкилостомид и др. В США предпринята попытка оценить относительную
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