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Partie pratique

Technique de collecte de matériel d'un patient pour la recherche bactériologique

Le choix du matériel pour la recherche en laboratoire est déterminé par la localisation du processus pathologique, les caractéristiques de la pathogenèse de la maladie et les propriétés biologiques du pathogène.

Le succès de la recherche bactériologique dépend de l'exactitude de l'échantillonnage du matériel. Il est recommandé de prendre du matériel pathologique pour examen bactériologique chez le patient avant le début d'un traitement spécifique, car sous l'influence des sulfamides, des antibiotiques, du sérum immun et d'autres agents thérapeutiques, les microbes pathogènes changent et perdent leur capacité à se développer sur des milieux nutritifs artificiels.

Prendre l'écoulement muqueux de la cavité nasale

Lors de la prise de matière des muqueuses du nez, la peau dans la circonférence des ouvertures externes du nez est essuyée avec du coton hydraté avec de l'alcool à 60 °. Après cela, le tampon est inséré profondément dans la cavité nasale et le mucus est retiré de la paroi du septum nasal. Prenez le matériel de différentes narines avec un seul écouvillon.

Écouvillon de mucus des muqueuses du pharynx

Le patient doit ouvrir grand la bouche. La racine de la langue est pressée avec une spatule. Ils essaient d'épingler la langue et de la pousser vers l'avant. Le tampon est inséré dans la cavité buccale avec la main droite, sans toucher la surface de la langue contenant une microflore abondante. Enlever la plaque et le mucus des amygdales, des arcades du palais mou et de la paroi pharyngée postérieure, faites attention aux sections altérées visibles de la membrane muqueuse.

Collecte des expectorations pour examen microbiologique

Pour l'examen bactériologique, la partie matinale des expectorations libérées lors d'une quinte de toux est collectée dans un flacon stérile avec un bouchon bien sélectionné. Chez les enfants qui ne savent pas cracher des expectorations, ils provoquent artificiellement une toux, irritant la racine de la langue avec un tampon.

Prise de selles pour examen bactériologique

Les excréments sont collectés dans des assiettes en carton stériles ou dans des bassins de bassins et d'émail, préalablement désinfectés avec une solution d'eau de Javel, puis lavés à plusieurs reprises avec de l'eau chaude.

Avec une spatule en bois stérile, 1 à 2 g de selles sont prélevés à différents endroits de la portion de matières fécales obtenue, placés dans des tubes à essai ou des bouteilles avec des bouchons bien fermés. En présence d'inclusions pathologiques (mucus, pus), ces dernières doivent être ajoutées à la graine.

Cocci pathogènes: staphylocoques, streptocoques

Staphylocoques

Matériel de recherche:

1) pus des lésions avec des maladies de peau pustuleuse, furoncles, etc.;

2) sang avec septicémie suspectée;

3) la membrane muqueuse du pharynx et du nasopharynx dans les maladies des voies respiratoires supérieures;

4) crachats dans la pneumonie;

5) vomissements et lavage gastrique.

Diagnostic microbiologique du staphylocoque

En laboratoire, pour le diagnostic des maladies staphylococciques, une méthode de recherche bactériologique est utilisée - le semis de matériel pathologique sur des milieux nutritifs.

1er jour. 1. Lors de l'examen du pus des plaies ouvertes, des expectorations, il est préférable d'utiliser la gélose au sel de jaune d'oeuf ou la gélose au lait de Chistovich. Pour l'inoculation des milieux salins, une grande quantité de matériau est prélevée, qui est frottée à la surface du milieu avec une spatule.

2. Lorsque vous semez du pus à partir d'abcès non ouverts, vous pouvez utiliser la viande-peptone habituelle ou la gélose au sang à 3%. Le matériau d'essai est appliqué sur un milieu nutritif en une quantité de 1 à 2 gouttes, puis distribué sur toute la surface de la tasse. L'incubation des cultures à une température de 37 ° C dure 18 à 24 heures.

2ème jour. Visualisez les cultures du matériel d'essai sur MP A, saline moléculaire, saline de jaune et gélose au sang. Les colonies de staphylocoques sur les milieux nutritifs solides sont rondes, légèrement convexes, avec des bords lisses. Par couleur, les colonies peuvent être blanc émail, jaune citron ou dorées. L'hémolyse peut être détectée sur gélose au sang autour des colonies de staphylocoques.

À partir d'une colonie présentant des signes typiques de staphylocoque, un frottis est effectué pour la coloration de Gram. En présence de staphylocoques, au microscope, des grappes caractéristiques de cocci sont colorées positivement avec une coloration de Gram.

3e jour. Voir les récoltes faites la veille. Selon la nature de la croissance sur gélose au sang, les staphylocoques peuvent être divisés en trois groupes. Les staphylocoques hémolytiquement actifs forment en 18 à 20 heures une zone d'hémolyse claire (l'agar devient complètement transparent, incolore) de 2 à 3 mm de large. Les staphylocoques faiblement hémolytiques provoquent une clarification incomplète de la gélose avec une largeur de zone de 1-1,5 mm. Les staphylocoques non hémolytiques n'altèrent pas la gélose au sang.

4ème jour. Parmi les cultures cultivées sur de la viande fauchée et de la gélose à la peptone, après une vérification préliminaire de la propreté, une réaction de coagulation plasmatique est établie.

Technique de réaction de coagulation au plasma

0,2-0,3 ml de plasma dilué 1: 3 - 1: 5 gomme est versé dans un tube de précipitation stérile avec une solution saline. La culture de gélose staphylococcus est introduite dans la boucle plasmatique. Les tubes à essai sont maintenus à une température de 37 ° C pendant la journée. Les souches de Staphylococcus produisant l'enzyme plasmocoagulase provoquent la coagulation du plasma, à la suite de quoi il se transforme en une masse gélatineuse. La coagulation du plasma est indiquée par un signe plus (+).

Streptocoque

De par la nature de la croissance sur gélose au sang, les streptocoques sont divisés en trois groupes: les streptocoques p-hémolytiques, les streptocoques a-verdissants yi-streptocoques (ne provoquent pas d'hémolyse sur la gélose au sang). La seule méthode pour différencier les streptocoques pathogènes et non pathogènes est la méthode sérologique de Lensfield. Lensfield a trouvé dans la paroi cellulaire du streptocoque un antigène polysaccharidique spécifique au groupe localisé superficiellement, qui nous a permis de diviser les streptocoques hémolytiques et verts en 17 groupes, capitalisés conditionnellement dans l'alphabet latin de A à S.Le groupe le plus étudié est A, qui combine la plupart des souches pathogènes pour l'homme.

Le matériel pathologique pour la recherche sur les streptocoques est:

1) plaque et mucus des amygdales et des muqueuses de la gorge avec angine de poitrine et scarlatine;

2) pus des lésions;

3) du sang avec des effets septiques.

Schéma de recherche microbiologique sur les streptocoques

1er jour: le matériel est ensemencé dans des boîtes de Pétri avec 3% de gélose au sang. Les cultures sont conservées dans un thermostat à une température de 37 ° C pendant pas plus de 20 heures.

2ème jour: regardez à travers les tasses.
Les souches de streptocoques du groupe sérologique A, les plus pathogènes pour l'homme, peuvent former des colonies de trois types:

a) mucoïde - grande consistance visqueuse et brillante; b) rugueux - petit, plat, avec une surface rugueuse, une structure granulaire, un bord robuste; c) lisse - brillant, petites colonies de couleur vert grisâtre.

À partir de colonies présentant des signes caractéristiques du streptocoque, des frottis pour la coloration de Gram sont préparés.

Les colonies entourées d'une zone d'hémolyse sont éliminées par une boucle et transférées dans un bouillon de martre.

3ème jour: voir la croissance du streptocoque dans le bouillon Martin. Dans les milieux nutritifs liquides, avec une croissance caractéristique de streptocoques, le bouillon reste complètement transparent, et seulement sur le fond et les parois du tube à essai se forme un précipité blanchâtre-blanchâtre-crémeux. Le schéma de croissance est déterminé par la longueur des chaînes: plus la chaîne est longue, meilleure est la granularité.

Méningocoques

Le méningocoque est l'agent causal de la méningite cérébrospinale épidémique. Les méningocoques peuvent être trouvés chez les personnes en bonne santé - porteuses de méningocoques.

Si une méningite est suspectée, le matériau de l'étude est le liquide céphalorachidien (LCR), obtenu par ponction du canal céphalorachidien. Pour les études microbiologiques, 5 ml de liquide céphalorachidien sont nécessaires.

Lorsque des porteurs de méningocoques sont identifiés, la sécrétion de la paroi postérieure du nasopharynx est examinée.

Examen du liquide céphalorachidien

1er jour: à partir du liquide céphalo-rachidien, en respectant les règles de stérilité, prenez 1,5 ml de liquide. En apparence, le liquide céphalo-rachidien peut être trouble ou transparent, incolore ou mélangé avec du sang. À partir du liquide céphalo-rachidien boueux, des frottis sont fabriqués et colorés selon Gram.

La liqueur est inoculée sur des milieux nutritifs contenant des protéines natives dans sa composition. Le semis se fait à l'aide de tampons selon la méthode de l'empreinte. Le matériau ainsi appliqué est réparti sur la surface du support avec une spatule.

2ème jour:

1) voir les récoltes faites la veille. Les colonies de méningocoques sont rondes, légèrement aplaties, de couleur bleuâtre, à bords lisses;

2) dans les colonies qui ressemblent à des méningocoques, prenez du matériel pour la microscopie. Gram frottis. Pendant la microscopie, on y trouve des cocci disposés au hasard, de couleur inégale selon Gram. Un tel polymorphisme est caractéristique des méningocoques cultivés sur des milieux nutritifs artificiels;

3) les colonies ayant des caractéristiques culturelles et des propriétés morphologiques typiques des méningocoques sont criblées dans un tube avec de la viande biseautée et de la gélose à la peptone et dans 2-3 tubes avec de la gélose au sérum. Les cultures sont incubées dans un incubateur à 37 ° C.

3e jour:

1) afficher les cultures. À la surface de la gélose sérique, les méningocoques forment un revêtement doux et humide de couleur grisâtre;

2) avec une culture pure du microbe étudié, ils ont mis en place une réaction d'agglutination avec des sérums antiméningococciques de type A et B agglutinants spécifiques (types de méningocoques, majoritairement distribués dans notre pays). Le processus d'interaction des agglutinines avec l'antigène correspondant se produit en 5 à 15 minutes.

Gonocoques

Les gonocoques sont les agents responsables de la gonorrhée - inflammation purulente des muqueuses des voies génito-urinaires et de la blénorrhée - une lésion spécifique de la conjonctive des yeux. Les gonocoques n'affectent que les humains, les animaux ont une immunité innée contre l'infection gonococcique.

Matériel pour la recherche bactériologique

Dans la forme aiguë de la gonorrhée, le matériel d'examen bactériologique chez l'homme est l'écoulement urétral, chez la femme, l'urètre, le vagin, le col de l'utérus, qui est prélevé avec un écouvillon de l'organe affecté.

Dans la forme chronique de la gonorrhée, ainsi que vers la fin du traitement de la gonorrhée aiguë, lorsque la quantité de sécrétions diminue fortement ou s'arrête, des fils ou des flocons purulents de mucus contenus dans l'urine sont examinés chez l'homme.

2 à 3 jours avant de prendre le matériel pour examen bactériologique, un patient atteint de gonorrhée ne reçoit pas d'antibiotiques, d'agents antiseptiques et ne fait pas de douches. Le matériel pathologique est immédiatement ensemencé sur des milieux nutritifs après réception, car les gonocoques sont très sensibles aux fluctuations de température, au dessèchement et même dans le contenu purulent meurent en quelques heures.

Le schéma de recherche bactériologique sur les gonocoques

Le gonocoque est très exigeant sur les milieux nutritifs. Pour sa culture, des milieux contenant des protéines natives sont utilisés: sang humain ou sérum sanguin. Une autre condition préalable est une humidité suffisante. Cependant, même sur des milieux nutritifs fraîchement préparés, il n'est pas toujours possible d'isoler une culture de gonocoques. 1. Microscopie. Le matériel pathologique reçu pour l'étude est microscopique. Au moins deux frottis sont préparés à partir de chaque échantillon de matériau. La coloration de Gram est la principale valeur diagnostique différentielle pour la reconnaissance du gonocoque. Dans le frottis, des cocci en forme de haricot doivent être trouvés, face à face avec des côtés concaves et ne se touchant pas. Les frottis colorés au gramme montrent des gonocoques gram ~.

2. Examen bactériologique du matériel pathologique pour les gonocoques:

1er jour: le matériel pathologique d'un patient suspecté de gonorrhée est ensemencé immédiatement après sa réception sur un support fraîchement préparé.

Le matériau appliqué sur un milieu nutritif solide est frotté avec une spatule pour obtenir des colonies de gonocoques isolées. Les tasses avec des récoltes sont placées pendant 24 heures dans un thermostat à 36-37 ° C.

2ème jour: les coupes ensemencées sont vues. Les colonies de gonocoques à la surface des milieux de culture ressemblent à des gouttes de rosée, transparentes, de couleur bleuâtre, avec une surface lisse et brillante, des bords uniformes.

Parmi les colonies caractéristiques du gonocoque, des frottis sont réalisés et colorés selon Gram.

Diagnostic différentiel du gonocoque

Les gonocoques doivent se différencier des méningocoques, ainsi que d'autres diplocoques à Gram négatif qui vivent sur les muqueuses des voies respiratoires supérieures.

Lors de la différenciation du gonocoque, tout d'abord, il est nécessaire de clarifier l'endroit d'où le diplocoque a été isolé: les gonocoques, comme indiqué ci-dessus, se trouvent principalement sur les muqueuses des voies génito-urinaires, avec lésions oculaires - sur la muqueuse de la conjonctive.
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Partie pratique

  1. Partie pratique
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  2. Partie pratique
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  4. Partie pratique
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  5. PARTIE PRATIQUE
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  7. PARTIE PRATIQUE
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  8. PARTIE PRATIQUE
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