Патологическая анатомия / Педиатрия / Патологическая физиология / Оториноларингология / Организация системы здравоохранения / Онкология / Неврология и нейрохирургия / Наследственные, генные болезни / Кожные и венерические болезни / История медицины / Инфекционные заболевания / Иммунология и аллергология / Гематология / Валеология / Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация, первая помощь / Гигиена и санэпидконтроль / Кардиология / Ветеринария / Вирусология / Внутренние болезни / Акушерство и гинекология Parasitologie médicale / Anatomie pathologique / Pédiatrie / Physiologie pathologique / Oto - rhino - laryngologie / Organisation d'un système de santé / Oncologie / Neurologie et neurochirurgie / Héréditaire, maladies génétiques / Maladies transmises par la peau et les maladies sexuellement transmissibles / Antécédents médicaux / Maladies infectieuses / Immunologie et allergologie / Hématologie / Valeologie / Soins intensifs, anesthésiologie et soins intensifs, premiers soins / Hygiène et contrôle sanitaire et épidémiologique / Cardiologie / Médecine vétérinaire / Virologie / Médecine interne / Obstétrique et gynécologie
Accueil
À propos du projet
Actualités médicales
Pour les auteurs
Livres autorisés sur la médecine
<< Précédente Suivant >>

Structure du virus de la grippe

P.V. SHOPPIN ET R.V. COMPANS (PW CHOPPIN, J. W. COMPANS)



I. INTRODUCTION

L'étude du virus de la grippe a longtemps été «à la pointe de la recherche structurelle en virologie. Le virus de la grippe a été l'un des premiers à être étudié: en utilisant la microscopie électronique (Taylor et al., 1943), et lors de l'utilisation de cet objet particulier comme modèle, il a été «montré que certains virus sont formés par bourgeonnement à partir des membranes cellulaires (Murphy, Bang, 1952). L'introduction d'une méthode de contraste négatif dans la virologie expérimentale a stimulé les études structurales des virus en général dans une plus grande mesure, et le virus de la grippe a fait l'objet des travaux les plus anciens et les plus frappants (Home et al., 1960; Hoyle et al., 1961), qui ont montré la présence de l'enveloppe dans le virus avec inclus des pointes de surface et une nucléocapside en spirale interne. Ces dernières années, le virus de la grippe a été étudié à l'aide de nombreuses méthodes physiques et chimiques (ce qui fait que ce virus est actuellement l'un des virus enveloppés les plus étudiés en termes d'organisation structurelle).

Un grand intérêt pour la structure et l'assemblage des virus de la grippe est associé à l'importance biologique de la maladie que les virus de la grippe provoquent chez les humains et les animaux. De plus, les virus de la grippe, comme les autres virus enveloppés, sont un excellent modèle pour étudier les membranes cellulaires. La possibilité d'utiliser des virus comme un tel modèle est due au fait que les particules virales ont une enveloppe externe formée à partir de la membrane cellulaire et morphologiquement identique à celle-ci. La commodité de l'utilisation de virus enveloppés à cet effet réside dans le fait qu'il s'agit d'un modèle simple (qui peut être obtenu sous une forme hautement purifiée et homogène pour des études physiques, chimiques et biologiques. Les virions grippaux ne contiennent qu'un petit nombre de protéines spécifiques au virus, composition '' qui peuvent changer au cours de la sélection de diverses souches et mutants et qui, dans de nombreux cas, peuvent être isolés dans un état biologiquement actif. La composition lipidique et glucidique des virions de la grippe peut être varient en fonction du type de cellules hôtes, car ces composants des membranes virales sont principalement déterminés par la cellule hôte. De nombreux auteurs ont souligné la commodité d'utiliser des virus comme modèles membranaires (Choppin et al., 1971; Lenard, Compans, 1974; Choppin, Compans, 1975; Compans Choppin 1975).

Ce chapitre décrit la composition générale et la morphologie des particules du virus de la grippe et l'interaction de ses divers composants. Les chapitres suivants (voir les chapitres 3, 6, 10 et 12) fournissent une description détaillée des propriétés biologiques et immunologiques des divers composants de la particule virale, ainsi que de la structure de l'acide nucléique et de certaines protéines individuelles. Il existe déjà plusieurs revues dans la littérature décrivant la structure et l'assemblage des virions de la grippe (Compans, Choppin, 1971, 1973, 1975; Choppin et al., 1972; Schulze, 1973; Laver, 1973; White, 1974; Choppin, 1975) .



COMPOSITION DE PARTICULES DE VIRUS



A. COMPOSITION CHIMIQUE GÉNÉRALE ET POIDS MOLÉCULAIRE RELATIF

La composition chimique des virions de la grippe ne peut être donnée de façon absolument précise car la population virale est hétérogène, et aussi parce que la composition de la particule virale est déterminée dans une certaine mesure (pour les lipides et les glucides) par la cellule hosino1M (voir ci-dessous). Cependant, une composition chimique approximative a été déterminée: 0,8-1,1% d'ARN, 70-75% de protéines, 20-24% de lipides et 5-8% de glucides (Ada, Perry, 1954; Frommhagen et al., 1959 ; Blough et al., 1967). La population virale contient généralement un grand nombre de particules virales "incomplètes" non infectieuses et, par conséquent, la teneur en ARN indiquée reflète la limite inférieure de la valeur caractéristique des virions infectieux qui contiennent un ensemble complet de fragments d'ARN viral. Une analyse approfondie des particules virales cultivées sur des cellules rénales de la lignée MDBK, qui se caractérisent par un rendement élevé de particules infectieuses avec de faibles rendements de virions défectueux par rapport aux autres cellules (Choppin, 1969), `` ainsi qu'une séparation supplémentaire des particules complètes dans un gradient de densité, apparemment devrait donner une valeur spécifiée de la teneur en ARN dans la particule virale.

La détermination de la valeur exacte du poids moléculaire relatif des virions grippaux est également compliquée par l'hétérogénéité de la population virale et les valeurs obtenues varient considérablement. En utilisant des méthodes d'analyse par microécopie aux rayons X et de sédimentation, les poids moléculaires relatifs de 270-106 à 290-106 ont été obtenus (Lauffer, Stanley, 1944; Scharp et al., 1945; Schramm, 1954). Une valeur faible (151 - K6) a été obtenue pour le virus FPV basée sur la détermination des coefficients de diffusion et de sédimentation (Schafer et al., 1952; Schramm, 1954), et une valeur plus élevée (360-106) basée sur la mesure de la teneur en protéines dans le virion et le comptage nombre de particules à l'aide d'un microscope électronique »(Reimer et al., 1966). En raison du fait que les tailles des particules virales varient, il est impossible d'obtenir la masse moléculaire relative (la même pour tous les virions de la population virale. De plus, dans le cas des virus enveloppés dont la forme est instable et les virions eux-mêmes sont facilement détruits, il est difficile de s'attendre à une grande précision dans l'obtention des résultats en utilisant des méthodes telles que le comptage des particules et la détermination des coefficients de sédimentation, bien que l'ampleur de la masse des virions de la grippe varie pour des raisons objectives et la même valeur ne peut pas être donnée pour tous les virus particules, et maintenant entre différents laboratoires, il existe un consensus sur les limites du contenu de l'ARN et des protéines dans la particule virale.

B. ACIDE RIBULO ACIDE

La teneur en ARN dans les virions de la grippe est de 0,8 à 1,1% (Ada, Perry, 1954; Frisch-Niggemeyer, Hoyle, 1956; Frommhagen et al., 1959). Étant donné que le degré de pureté des préparations virales utilisées n'a pas été établi avec précision dans ces études, la valeur ci-dessus laisse la place à certains CO (Opinions. Ainsi, selon Frisch-Niggemeyer et Hoyle (1956), la teneur en ARN dans la nucléoprotéine du virus grippal isolé est de 5. 3%, alors que, selon des études plus récentes, cette valeur est de 10 à 12% (Pons et al., 1969; Krug, 1971.) Cela indique une faible précision dans la détermination de la teneur en ARN dans le virion dans les premières études. travaux (basés sur la détermination de la teneur en ARN dans le virion ) Valeur de la taille du génome viral - environ 2 YU6 (Frisch-Niggemeyer, 1956) est également significativement plus faible que le 4-YU6-5 YU6 déterminé par électrophorèse de l'ARN viral dans le gel.

Les données biologiques et biochimiques actuellement connues indiquent que l'ARN du virus de la grippe existe dans le virion sous la forme de plusieurs fragments. Nous ne donnons pas une preuve complète de cette situation, puisque cette question sera discutée en détail dans la Sec. 6. Lorsqu'une électrophorèse d'ARN viral dans un gel de polyacrylamide est observée six ou sept fragments avec un poids moléculaire relatif allant de 3,5 à 105 à 10 à 105 daltons1 (Skehel, 1971; Lewandowski et al., 1971; Bischop et al, 1971). Il a été établi que la taille des fragments est discrète, et l'étude de leurs extrémités indique que l'apparition des fragments n'est pas associée à la fragmentation d'une molécule d'ARN ou à son clivage avec la nucléase (Young, Content, 1971; Lewandowski et al., 1971). Les tailles des fragments d'ARN individuels sont bien en corrélation avec le poids moléculaire relatif des polypeptides codés par le virus, et à cet égard, il peut être suggéré que chaque fragment du génome code pour un polypeptide viral. L'ARN viral fait partie de la ribonucléoprotéine spirale intravirale et, comme cela sera montré ci-dessous, des ribonucléolotéines de taille discrète contenant divers fragments d'ARN viral ont été détectées. Jusqu'à présent, aucune preuve convaincante n'a été obtenue sur l'existence de liaisons covalentes ou d'agrégation spécifique de fragments d'ARN viral dans le virion ou dans l'infecté. la cage. Des agrégats d'un poids moléculaire relatif d'environ 3 à 106 ont été obtenus par extraction d'ARN à partir de virions en présence de cations divalents. Au cours du traitement thermique, ces agrégats se sont transformés en structures à sédimentation lente (Agrawal et Bruening, 1966; Pons, 1967). Une étude en microscopie électronique a signalé la découverte de molécules d'ARN d'un poids moléculaire relatif de 3 à 106, qui se dissocient en molécules plus petites à pH 3,0 (Li et Seto, 1971). Cependant, l'hétérogénéité observée ne prouve pas qu'il existe une agrégation spécifique de tous les fragments du génome viral.

Le contenu dans le virion de divers fragments d'ARN varie. Plusieurs passages du virus de la grippe avec une multiplicité d'infection élevée conduisent à la reproduction de particules non infectieuses, ce qui se reflète dans le faible rapport de l'infectiosité des médicaments à leur activité hémagglutinante (von Magnus, 1964). Un tel virus est appelé incomplet. Il se caractérise par l'absence du plus grand fragment d'ARN et une teneur accrue en fragments hétérogènes de faible poids moléculaire (Pons, Hirst, 1968; Dues-berg, 1968; Choppin et Pons, 1970). Certaines différences sont observées dans les profils de sédimentation de l'ARN isolé de différentes souches, ainsi que de virus de la même souche à différents temps de culture et à différentes multiplicités d'infection (Barry et al., 1970). Ces différences peuvent refléter le taux de synthèse inégal de différents fragments d'ARN virionique; dans ce cas, les fragments de faible poids moléculaire sont susceptibles d'être synthétisés à un rythme plus rapide que les plus gros.

B. PROTÉINES

1. Le nombre et la fonction des polypeptides

Les divers polypeptides trouvés dans les virions de la grippe seront brièvement décrits ici parce que leur morphologie et leur relation dans le virion seront discutées dans la section III de ce chapitre. De plus, les propriétés de certaines de ces protéines, en particulier l'hématglutinine et la neuraminidase, seront discutées en détail dans les chapitres suivants du livre [synthèse (voir Ch. 8), chimique, biologique (voir Ch. 3) et immunologique (voir Ch. 10 et 12) propriétés]. Bien que le virion de la grippe soit formé par le bourgeonnement de la membrane cytoplasmique de la cellule hôte, les polypeptides hôtes ne sont pas présents dans le virion sous forme de protéines structurales dans diverses cultures cellulaires (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970), ainsi que l'absence de protéines communes dans les virus de la grippe et d'autres virus enveloppés cultivés sur des cellules du même type. De plus, tous les polypeptides inclus dans la composition du virion grippal peuvent être détectés dans la cellule infectée pendant la synthèse sous forme de nouvelles formations protéiques (Lazarowitz et al., 1971; Skehel, 1972; Klenk et al., 1972b; Compans, 1973a).

Étant donné que les trois protéines qui composent le virion de la grippe, à savoir la protéine nucléocapside, l'hémagglutinine et la neuraminidase, peuvent être identifiées immunologiquement (voir chapitres 10 et 12), à partir des années 60, l'attention a été attirée principalement sur l'étude, à savoir ces protéines. Les premiers travaux utilisant l'électrophorèse ont également révélé la présence de trois polypeptides majeurs identifiés avec ces trois antigènes. Cependant, après l'introduction de l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide à haute résolution dans les études expérimentales, ainsi que des méthodes pour introduire des marqueurs radioactifs dans les acides aminés et les sucres (pour identifier les protéines et les glycoprotéines), il a été constaté qu'au moins sept polypeptides structurels un poids moléculaire d'environ 25 000 à 94 000 (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970). Il existe actuellement un consensus; opinion sur la composition des polypeptides dans les virions de la grippe (Haslam et al., 1970a; Cornpans et al., 1970a; Schulze, 1970; Skehel, Schild, 1971; Lazarowitz et al., 1971, 1973a; Klenk et al., 1972a). La figure 1 montre le profil électrophorétique des polypeptides du virus de la grippe de type A (souche WSN) cultivés sur les cellules primaires du rein de singe rhésus. Dans le tableau. La figure 6 présente des données sur les polypeptides du virus de la grippe, dont l'existence est actuellement bien établie, ainsi que des informations sur leur rôle fonctionnel et leur localisation dans le virion (si elles sont connues). Toutes les désignations correspondent à celles adoptées lors de la conférence sur la grippe, tenue en 1971 à Madison (USA) (Kilbourne et al., 1972).

2. Polypeptides P

Les fonctions et la localisation exacte dans le virion des plus grosses protéines avec un poids moléculaire relatif de 81 000 à 94 000, désignées Pi et P2, n'ont pas encore été établies. On sait cependant que ces protéines sont des composants internes du virion; ils sont très probablement associés à une nucléocapside et peuvent réaliser l'activité d'ARN transcriptase du virion (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970; Skehel, 1971; Klenk et al., 1972a; Bishop et al., 1972; Caliguiri, Compans , 1974).

3. Hémagglutinine

La plus grande glycoprotéine, l'hémagglutinine, désignée par le symbole HA, avec un poids moléculaire relatif de 75 000 à 80 000, est une protéine qui adsorbe les virions sur les récepteurs cellulaires. Il est synthétisé en tant que produit primaire séparé d'un gène, mais dans certaines conditions, il peut se cliver protéolytiquement pour former deux polypeptides: HAi et HA2 - avec un poids moléculaire relatif d'environ 50000 et 28000, respectivement (Lazarowitz et al., 1971). Un tel clivage, dont le degré peut varier considérablement, dépend du type de la cellule hôte, de la souche du virus et de la présence ou de l'absence de plasminogène ou d'autres enzymes protéolytiques dans le milieu de culture cellulaire ou un autre système hôte, comme, par exemple, le liquide allantoïdien d'un embryon de poulet (Lazarowitz et al., 1971, 1973a, b; Rifkin et al., 1972; Klenk et al., 1972b; Skehel, 1972; Stanley et al., 1973). Dans les embryons de poulet, un clivage complet se produit généralement (Lazarowitz et al., 1973), ce qui a conduit à la découverte de deux polypeptides d'hémagglutinine dans les premiers travaux (Laver, 1971; Stanley, Haslam, 1971), généralement appelée chaîne lourde et légère de l'hémagglutinine et indiquée par les symboles HAi et HA2 . Ces deux composants de la protéine HA sont maintenus proches l'un de l'autre en raison de l'existence de ponts disulfures entre eux (Laver, 1971). Le clivage de la molécule HA n'est pas une condition préalable à l'assemblage d'une particule virale ou à la présence d'une activité hémagglutinante (Lazarowitz et al., 1963a; Stanley et al., 1973) et dans certaines conditions des virions se forment sans clivage des molécules HA du tout (Lazarowitz et al., 1973a, b; Choppin et al., 1975). ce qui indique le rôle insignifiant de cette étape dans le processus d'assemblage. La figure 2 montre le profil électrophorétique des protéines de la souche WSN du virus de la grippe, où le clivage du polypeptide HA ne se produit pas en l'absence de plasminogène sérique, mais se produit lorsque cette enzyme est présente dans le milieu. Récemment, il a été démontré que l'infectiosité des virions de la grippe (de type A et de type B), dans lesquels le clivage HA n'était pas initialement détecté, peut être augmentée par le clivage de ces molécules avec de la trypsine (Choppin, Lazorowitz, données non publiées; Klenk et Rott , message personnel). Un mécanisme détaillé pour une telle augmentation de l'infectiosité n'a pas encore été établi, cependant, lors de sa clarification, les premiers stades de l'interaction du virus avec la cellule, non associés à l'adsorption, devraient probablement être pris en compte.

Comme cela sera discuté en détail dans la Sec. 3, 10 et 12, l'hémagglutinine et la neuraminidase isolées de différentes souches du virus de la grippe diffèrent considérablement en termes de séquence d'acides aminés et de propriétés antigéniques. Ces glycoprotéines de surface sont responsables de la spécificité des souches de virions grippaux.

4. Neuraminidase

Le polypeptide de la neuraminidase (NA) est une glycoprotéine dont les sous-unités ont un poids moléculaire relatif allant de 5 000 à 65 000. Le poids moléculaire relatif de NA dépend à la fois de la souche du virus et des conditions d'isolement adoptées dans divers laboratoires (Haslam et al., 1970b; Webster, 1970; Skehel et Schild, 1971; Gregoriades, 1972; Lazdins et al., 1972). Deux types différents de polypeptides NA ont été trouvés lorsqu'il a été isolé d'un type de virion (Webster, 1970; Skehel, Schild, 1971; Bucher, Kilbourne, 1972; Lazdins et al., 1972). Lazdins et al. (1972) ont découvert un composant majeur avec un poids moléculaire relatif de 63 000 et un polypeptide mineur de 56 000; cependant, lors du traitement de la préparation virale avec de la trypsine, ils n'ont trouvé qu'un seul composant de faible poids moléculaire. Cela indique que le plus petit polypeptide de poids moléculaire a été obtenu à partir du plus grand en utilisant un clivage protéolytique. Le plus petit polypeptide ne s'est pas agrégé. Cela signifie que le traitement protéolytique clive la région hydrophobe de la molécule. L'examen au microscope électronique de Wrigley et al. (1973) ont montré que lors du traitement avec de la trypsine, la "jambe" du "pic" de neuraminidase en forme de champignon est enlevée. La préservation de l'activité enzymatique au cours de ce traitement indique que le centre actif de l'enzyme est situé sur la «tête» en forme d'haltère de la «pointe» de la neuraminidase. Comme cela sera décrit en détail dans la Sec. 3, il existe de nombreuses preuves que l'enzyme est présente dans le virion sous la forme d'un tétramère avec un poids moléculaire relatif de 200 000 à 250 000 (Kendal, Eckert, 1972; Bucher, Kilbourne, 1972; Lazdins et al., 1972; Wrigley et al., 1973 )

5.Protéine nucléocapside

Le polypeptide désigné par le symbole NP est la sous-unité protéique de la nucléocapside (Duesberg, 1969; Joss et al., 1969; Pons et al., 1969). Les estimations du poids moléculaire relatif effectuées dans de nombreux laboratoires pour la protéine NP de diverses souches du virus de la grippe ont donné des valeurs de 55 000 à 65 000. Une valeur de 60 000 est généralement considérée comme le poids moléculaire relatif moyen de cette protéine. Il ne contient pas de glucides et est un antigène spécifique au type, la classification du virus de la grippe en types A, B et C est basée sur ses propriétés (voir. Ch. 12). Аминокислотный анализ белка NP, выделенного из штамма вируса гриппа типов А и типа В, дал существенно различные результаты (Laver, Baker, 1972). Белок NP обладает аффинным сродством как к вирионной РНК, так и к комплементарным к ней цепям (Scholtissek, Becht, 1971).

7. Количество полипептидов в вирионе

В связи с тем что вирионы гриппа гетерогенны по своим размерам, а также в связи со штаммовой вариабельностью очень трудно точно определить число молекул различных полипептидов, входящих в состав отдельной вирусной частицы. Кроме того, число молекул полипептида НА, а также продуктов их расщепления — полипептидов HAi и НАг — может существенно зависеть от степени расщепления НА, которая, как было описано ранее, в свою очередь зависит от многих условий. И, наконец, общее число молекул гликопротеидов НА и NA в вирионе одного штамма вируса может меняться в зависимости от типа клетки-хозяина (Lazarowitzetal., 1973а; Choppin et al., 1975). Таким образом, любой расчет числа полипептидов в вирионе гриппа можно считать лишь приблизительным и справедливым только для усредненного вириона при определенном наборе условий. Dans le tableau. 7 приведены предельные значения для числа полипептидов в вирионе, полученных в различных лабораториях с довольно хорошим совпадением результатов. Для более детальной информации о значениях, «полученных разными авторами, изучавшими различные штаммы вирусов, читатель может обратиться к подробному обзору White (1974), где сведены данные о белках вируса гриппа.

8. Вирусы гриппа В и С

Исследование химического состава и структуры вирионов, а также содержащихся в них белков было выполнено в основном на штаммах вирусов гриппа А. В некоторых работах, однако, в качестве объекта изучения использовали штамм Lee вируса гриппа В. В основном была показана идентичность химического состава и структуры вирусов гриппа Аи В (Haslam et al., 1970b; Lazdins et al., 1972; Laver, Baker, 1972; Oxford, 1973; Tobita, Kilbourne, 1975). Однако некоторые небольшие, но существенные различия -были найдены для штамма GL/1760/54 вируса гриппа В (Choppin et al., 1975). Этот вирус, выращенный на клетках почки хомячка, не имел белка Р, а сравнение злектрофоретического профиля белков вируса этого штамма и штамма WSN вируса гриппа А показало, что белки НА, NP и NA штамма GL/1760 имеют несколько большую молекулярную массу (относительная молекулярная масса была равна соответственно 82 000, 66 000 и 64 000), в то время, как М-белок штамма GL/1760 (молекулярная масса — 24 000) был несколько меньше, чем М-белок штамма WSN. На 3 представлен электрофоретичеокий профиль в полиакриламидном геле белков штамма B/GL/1760. Удивительным фактом, обнаруженным для штамма GL/1760, который выращивали на клетках почий хомячка, было полное отсутствие расщепления белка НА. Тем не менее можно было провести расщепление полипептида НА на фрагменты HAi и НА2 в системе in vitro. Было, кроме того, показано, что полипептиды NA и HAi содержат остатки фукозы, а НА2 их не содержит и в его состав входит глюкозамин. Таким образом, в этом случае в области НА2 гемагглютинина «шипа» наблюдается отсутствие сахарного остатка, обычно локализованного на концах сахарных цепочек. С помощью этой области, как известно, «шип» гемагглютинина присоединяется к вирусной мембране. Отсутствие фукозы в составе полипептида НА2 и наличие ее в составе HAi и >NA этого штамма, а также в составе полипептида НА2 других штаммов указывает на возможное наличие более тесного взаимодействия полипептида НА2 штамма GL/1760 с вирусной мембраной и на то, что это взаимодействие может оказать влияние на процесс гликозидирования, заканчивающийся на поверхности мембраны.

Другим интересным наблюдением, сделанным при анализе экспериментов по /позднему и раннему включению радиоактивных аминокислот в вирион гриппа штамма GL/1760, явилось то, что мембранный белок синтезировался в процессе репродукции относительно поздно, а белок NP, синтезирующийся на ранних этапах инфекционного цикла, инкорпорировался в вирионы, уже содержащие белок М, который синтезируется позднее. Этот результат был получен с помощью метода включения в белки радиоактивных аминокислот на ранних и поздних этапах репродукции (Choppin et al., 1975). Сходные данные были недавно получены для штамма WSN (Meier-Ewert, Compans, 1974). Эти результаты согласуются с высказанным ранее утверждением, что синтез М-белка жестко детерминируется и может являться этапом, на котором контролируется скорость вирусной репродукции (Lazaro-witz et al., 1971).

Относительно мало работ было выполнено с использованием в качестве объекта изучения вируса гриппа С. Выполненное недавно предварительное исследование показало в основном сходность его химического состава с составом вирусов гриппа А и В. Однако следует отметить, что вирус гриппа С не обладал нейраминидазной активностью. Это указывает на то, что этот вирус может содержать в своем составе гликозидазу другого типа, способную разрушать вирусные рецепторы (Kendal, Kiley, 1974).

г. липиды

Липиды, содержащиеся в вирионе гриппа, локализованы в вирусной мембране и, как будет описано далее, существуют в виде двойного липидного слоя. Из 20—24% массы вириона, приходящихся на липиды, основную часть составляют фосфолипиды (ГО—13%) и холестерин (6—8%), а также малый по количеству, но, вероятно, важный компонент — гликолипиды (1—2%) (Frommhagen et al., 1959; Kates et al., 1961; Blough, Merilie, 1970; Klenk et al., 1972a; Klenk, Choppin, неопубликованные данные). Проведенные ранее исследования показали, что предварительно меченные клеточные липиды включаются в вирионы гриппа (Wecker, 1957) и что липидный состав вирионов, культивированных на различных клетках, сходен с липидным составом этих клеток (Kates et al., 1961). Было обнаружено, что клетка-хозяин играет определяющую роль в формировании липидов вируса. Позднее Blough и соавт. проанализировали липидный состав вирусов-гриппа различных штаммов, выращенных на куриных эмбрионах (Tiffany, Blough, 1969; Blough, 1971; Blough, Tiffany, 1973). На основании различий в липидном составе этих вирусов авторы предположили, что состав липидов вируса определяют белки вирусной оболочки за счет селективного взаимодействия между молекулами белков и липидов. Однако наблюдаемые различия касались в основном жирных кислот нейтральных липидов. В связи с тем, что этот компонент составляет лишь небольшую часть от общего липидного содержания вируса и поскольку жирные кислоты полярных липидов, входящие в состав различных штаммов вируса гриппа, в основном сходны, значение указанных выше различий пока еще неясны. Анализ липидного состава был проведен для вирионов, выращенных на куриных эмбрионах в условиях множественного цикла репродукции; штаммы могли различаться по кинетике роста вирусной популяции и по степени влияния на клеточный метаболизм. В связи с этим мог меняться липидный состав мембран хозяйских клеток. Кроме того, анализ липидного состава проводили на вирионах, выращенных в разное время на различных партиях эмбрионов, что также трудно учесть при интерпретации полученных результатов.

Анализ липидного состава вирионов гриппа при их культивировании в более контролируемых условиях клеточных культур имеет очевидные преимущества. Было проведено детальное сравнение липидного состава оболочечных вирусов и плазменных мембран различных клеток, на которых эти вирусы культивировались. Анализировали включение в мембраны фосфолшгадов, холестерина, гликолипидов и жирных кислот (Klenk, Choppin, 1969, 1970а, b; Choppin et al., 1971; Renkonen et al., 1971; Quigley et al., 1971; Laine et al., 1972; McSharry, Wagner, 1971). Хотя в некоторых случаях и наблюдались незначительные различия, липидный состав вирусов был очень сходен с липидным составом плазматических мембран хозяйских клеток. Концентрация фосфолипидов в данном вирусном штамме может отличаться по крайней мере в 3 раза в зависимости от типа клетки-хозяина. Наблюдались также качественные различия в составе гликолипидов (Klenk, Choppin, 1969, 1970b). Кроме того, было показано, что содержание жирных кислот может меняться в 4 раза в зависимости от среды культивирования (Klenk, Choppin, 1970b). Приведенные результаты указывают на то, что, хотя при определенных условиях и могут наблюдаться незначительные вариации в липидном составе вируса гриппа, за которые могут быть ответственны вирусные белки, определяющее влияние на липидную композицию мембраны оказывает клетка-хозяин и что липидный состав вируса повторяет липидный состав плазматических мембран хозяйских клеток.

Однако наблюдаемое сходство липидного состава вирусных и клеточных мембран и утверждение об определяющем влиянии клетки-хозяина на состав липидов вириона совсем не означают, что все липиды, включающиеся в дальнейшем в вирусную частицу, присутствуют в клетке к началу инфекционного процесса. Действительно, тот факт, что для многих оболочечных вирусов вирусная репродукция продолжается в течение длительного периода, указывает на то, что некоторые вновь синтезированные молекулы липидов инкорпорируются в вирионы. Однако сообщение Blough (1974) о том, что вновь синтезированные липиды включаются в состав вириона, совсем неэквивалентно утверждению, что синтез этих липидов определяется вирусом. Это означает только, что биосинтез липидов, которые впоследствии войдут в состав вирусной мембраны, не прекращается после начала инфекции и что при оборке вирусной частицы используются как вновь синтезирующиеся, так и уже предсуществующие в клетке молекулы липидов.

Основное качественное различие между липидами вируса и клетки-хозяина состоит в том, что в вирионах гриппа не обнаруживается гликолипидов, содержащих нейраминовую кислоту (ганглеозиды); нейраминовой кислоты нет также в составе вирусных гликопротеидов (Klenk, Choppin, 1970b; Klenk et al., 1970b). Отсутствие остатков нейраминовой кислоты в вирионе объясняется включением вирусного фермента нейраминидазы в те области мембраны, которые впоследствии сформируют вирусную оболочку. Оболочечные вирусы, не содержащие нейраминидазу, такие, например, как вирус везикулярного стоматита, содержат в мембране ганглеозиды, сходные с ганглеозидами клеточных мембран (Klenk, Choppin, 1971).

Липиды, входящие в состав мембран вирусов гриппа и других оболочечных вирусов, явились предметом вышедших недавно обзоров '(Choppin et al., 1971; Blough, Tiffany, 1973; Klenk, 1973, 1974; Lenard, Compans, 1974; Choppin, Compans, 1975; Сотргпэ, Choppin, 1975).

Д. УГЛЕВОДЫ

Кроме рибозы, входящей в состав вирусной РНК, приблизительно 5—8% массы вириона гриппа составляют углеводы (Frommhagen et al., 1959). Большая часть, если не все углеводы вириона, ковалентно присоединена к молекулам гликопротеидов или гликолипидов. В вирионе гриппа присутствуют галактоза, манноза, глюкоза-мин и фукоза, а состав Сахаров эквивалентен составу углеводного компонента мукопротеидов клетки-хозяина (Ada, Gottschalk, 1956). Изолированный HAi-гликопротеид гемагглютинина вируса гриппа штамма BEL, который предварительно (культивировали на куриных эмбрионах, содержал 9,4% N-ацетилглюкозамина и около 20% его общей массы составляли углеводы (Laver, 1971, 1973). Углеводы являются именно тем хозяйским антигеном, который был найден в составе очищенных вириояов (Knight, 1946; Smith et al., 1953) в ковалентно связанном с вирусным гликопротеидом виде (НагЬое, 1963; Laver, Webster, 1966; Lee et al., 1969). Из мембран инфицированных клеток (Laver, Webster, 1966) и из аллантоисной жидкости куриных эмбрионов (Haukenes et al., 1965; Lee et al., 1969) был выделен углеводный компонент, который обладал антигенным родством с хозяйским антигеном очищенных вирионов. Антиген, выделенный из аллантоисной жидкости, являлся муко-полисахаридсульфатом, не содержащим уроновой или нейраминовой кислоты, и по своему составу принадлежал к классу кератосульфатов (Haukenes et al., 1965). Недавно было показано, что гликопротеиды вириона гриппа селективно метятся радиоактивным сульфатом, связывающимся, вероятно, с углеводной частью в виде эфира (Compans, Pinter, 1975). Кроме того, 'было обнаружено, что сульфат включается в компонент с большой относительной молекулярной массой, являющийся, вероятно, мукополисахаридом хозяйской клетки, который может быть тождествен хозяйскому клеточному антигену, ассоциированному с очищенным вирионом.

Включение радиоактивных предшественников глюкозами-на и фукозы в вирусные гликопротеиды НА и NA указывает на то, что углеводная часть этих молекул синтезируется уже после начала вирусной инфекции (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970). Синтезируются ли вновь или используются существовавшие ранее углеводы для построения вирусных гликолипидов — вопрос, который еще требует разрешения.

Существующие в настоящее время факты указывают на то, что последовательность и состав углеводных остатков в вирусных гликопротеидах и гликолипидах определяются клеткой-хозяином. В дополнение к указанным «хозяйским» антигенным свойствам углеводного компонента различие в электрофоретической подвижности гликопротеидов вирионов гриппа, выращенных на различных клеточных культурах, указывает на то, что какое-то количество сахарных остатков, включенных в молекулы гликопротеидов, может иметь клеточное происхождение (Haslam et al., 1970a; Compans et al., 1970a; Schulze, 1970). Для синтеза углеводных цепочек гликопротеидов необходимо по крайней мере четыре типа специфических трансфераз и, вероятно, сама вирусная частица не содержит достаточного количества генетической информации для кодирования синтеза этих ферментов. Гликозидирование полипептида НА, вероятно, происходит на мембранах эндо-плазматического ретикулума по механизму, сходному с механизмом синтеза углеводов Клеточных гликопротеидов (Compans, 1973b; Hay, 1974).

Остатки нейраминовой кислоты не содержатся в вирионах гриппа, вероятно, потому, что в них присутствует нейраминидаза (Klenk, Choppin, 1970; Klenk et al., 1970a, b; Palese, et al., 1974). Вирионы парагриппа, в состав (Которых также входят нейраминидаза, не содержат в тликопротеидах и глико-липидах остатков нейраминовой кислоты (Klenk, Choppin, 1970b; Klenk et al., 1970a, b). В то же время в состав оболо-чечных вирусов других типов, не 'содержащих нейраминида-зы, входят остатки нейраминовой кислоты. Нейраминидаза, вероятно, необходима тем оболочечным вирусам, которые прикрепляются к рецепторам, содержащим нейраминовую кислоту. Этот вопрос будет подробнее освещен в гл. 3. В «летках, зараженных температурочувствительным мутантом, лишенным нейраминидазы, синтезируются вирусные частицы, содержащие остатки нейраминовой кислоты и образующие большие по размерам агрегаты на поверхности клетки (Palese et al., 1974). Процесс агрегации может быть подавлен добавлением нейраминидазы. Эти факты указывают на то, что нейраминовая кислота, содержащаяся в составе ви-риона, может служить рецептором для гемагглютининов других вирусных частиц, а это должно способствовать агрегации и низкому выходу инфекционных частиц. Таким образом, отсутствие остатков нейраминовой кислоты в вирионах гриппа и парагриппа является вирусспецифической модификацией вирусных углеводов; этот .процесс необходим для нормального высвобождения вируса из инфицированной «летки.

В присутствии модифицированного метаболита 2-дезо,кси-D-глюкозы или высоких концентраций глюкозамина интиби-руется процесс гликозидирования вирусных гликопротеидов и в инфицированных клетках обнаруживается негликозиди-рованный или гликозидированный частично полипептид — предшественник НА (Klenk et al., 1972b; Gandhi et al., 1972). Дефектные гликопротеиды, синтезируемые в присутствии указанных выше ингибиторов, обнаруживаются на гладких и грубых мембранах эндоплазматического ретикулума и включаются в состав вновь синтезируемых вирусных частиц (Klenk et al., 1974; Compans et al., 1974). Эти вирусные частицы обладали пониженной инфекционностью и гемагглюти-нирующей активностью. Таким образом, наличие нормального углеводного компонента, вероятно, не является необходимым условием ассоциации гликопротеидов с цитоплазматиче-скими мембранами. Однако, поскольку в этом случае имеет место снижение выхода зрелых вирионов, можно заключить, что процесс гликозидирования, вероятно, необходим для реализации полной 'биологической активности 'вириона.

Salut. МОРФОЛОГИЯ И ВЗАИМОСВЯЗЬ

КОМПОНЕНТОВ В ВИРИОНЕ

А. РАЗМЕР И ФОРМА

Ранние исследования вируса гриппа с помощью методов ультрафильтрации и электронной микроскопии показали, что вирионы гриппа имеют форму, близкую к сферической, со средним диаметром 80—120 нм (Elford et al., 1936; Taylor et al., 1943). С помощью негативного контрастирования вирионов гриппа было обнаружено, что поверхность вирусных частиц покрыта близко расположенными друг к другу выступами, ворсинками длиной 10—12 нм и что нуклеокапсид, заключенный внутри вирусной оболочки, имеет спиральную симметрию (Home et al., 1960; Hoyle et al., 1961). Метод негативного контрастирования позволил, кроме того, обнаружить гетерогенность и плеоморфизм популяции вирионов гриппа. Плеоморфизм, однако, обусловлен в основном методом выделения и очистки и может быть сведен к минимуму с помощью фиксации вирионов перед контрастированием (Choppin et al., 1961). На 4 и 5 показаны вирионы гриппа после их негативного контрастирования.

Хотя большинство лабораторных штаммов вируса гриппа имеет форму вирионов, близкую к сферической, оттененные напылением препараты штамма Япония/305 вируса гриппа А имели слегка вытянутую, бактериоподобную форму вирусных частиц (Choppin et al., 1960), а при наблюдении с помощью метода ультратонких срезов вновь образующихся вирионов гриппа было показано, что они имеют слегка вытянутую форму (6) (Compans, Dimmock, 1969; Bachi et al., 1969; Compans et al., 1970b). Нуклеокапсид вирусных частиц г, ультратонком срезе выглядит как нити с более высокой электронной плотностью, ориентированные параллельно длинной оси частицы, а оболочка представляет собой мембрану го слоем выступов на внешней поверхности (см. 5—8).

Кроме обычно наблюдаемых частиц, форма которых близка к сферической или слегка вытянутой, в препаратах вируса гриппа иногда обнаруживаются филаментозные формы. Филаментозные вирионы покрыты поверхностными выступами и имеют диаметр, характерный для сферических вирионов, т. е. 80—100 нм, но их длина может быть очень велика — 4 мкм (Mosely, Wickoff, 1946; Chu et al., 1949; Choppin et al., 1960, 1961). На 5 показан филаментозный вирион гриппа при его негативном контрастировании. Наличие филаментозных форм характерно для вновь выделенных штаммов (Chu et al., 1949; Choppin et al., 1960). Возможно, что филаментозные формы также преобладают при инфекциях верхних дыхательных путей человека, поскольку при первом пассаже на куриных эмбрионах вирусная популяция содержит большое число филаментов, в то время как -после нескольких пассажей в популяции обнаруживаются преимущественно сферические частицы (Choppin et al., 1960).
Маловероятно, что первый пассаж на куриных эмбрионах приводит к селекции филаментозных частиц из преимущественно сферической популяции вирусов при инфекции у человека, а затем, при последующих пассажах на куриных эмбрионах, вновь отбираются сферические формы. Однако природа морфологии вирионов, продуцируемых при заболеваниях человека, будет установлена лишь после исследования достаточно большого числа вирусных популяций, выделенных непосредственно у человека. Была определена удельная инфекционность филаментозных форм. Она оказалась выше, чем удельная инфекционность сферических вирусных частиц. Филаментозные вирионы содержали больше РНК в расчете на один вирион, чем сферические (Ada et al., 1958).

Способность IK репродукции филаментозных форм является генетическим признаком, который может быть утрачен или приобретен в процессе рекомбинации (Kilbourne, Murphy, 1960; Kilbourne, 1963; Choppin, 1963). Рекомбинация между штаммами АО, для которых характерны сферические частицы, с филаментозными штаммами А2 приводила к возникновению сферических частиц с признаками штамма А2 и вирионов высокофиламентозного штамма АО. Таким образом, признак филаментозности может использоваться в качестве маркера в генетических исследованиях. Также генетически обусловленные вариации морфологии вирионов указывают на различие в структурной организации или в скорости синтеза белков вирусной оболочки, вероятно М-белка. Предварительные исследования сферических и филаментозных форм одного и того же штамма не выявили различий в суммарном белковом составе (Choppin, неопубликованные данные), однако для полного выяснения этого вопроса требуется более детальное изучение.

Было показано, что поверхностно-активные вещества, такие, как алкоголят витамина А, индуцируют образование филаментозных и высокоплеоморфных частиц в штаммах, для которых в обычных условиях характерна продукция сферических частиц (Blough, 1963). Хотя эти наблюдения и указывают на то, что форма вирионов может зависеть от присутствия такого рода соединений, они не противоречат данным, которые интерпретируются с учетом генетического контроля за образованием филаментозных форм при отсутствии поверхностно-активных веществ.

При исследовании вирионов гриппа с помощью методики лиофильного высушивания и методики «фризэйтчинг» (Nermut, Frank, 1971) наблюдали высокую степень однородности популяции вирионов. Некоторые из частиц давали тени, характерные для правильных многогранников, и на этом основании был сделан вывод, что вирионы гриппа могут иметь икосаэдрическую симметрию. Наблюдались также упорядоченные гексагональные образования на поверхности вирионов (Almeida, Waterson, 1957; Archetti et al., 1967; Nermut, Frank, 1971), а в случае вирионов гриппа С была обнаружена гексагональная решетка, выстилающая внутреннюю сторону поверхности вириона (Waterson et al., 1963; Flewett, Apostolov, 1967). Было предположено, что М-белок вируса гриппа образует икосаэдрическую оболочку под двойным липидным слоем и таким образом выступает в качестве своего рода капсида вируса (Schulze, 1973). Однако более поздние эксперименты не подтвердили наличия у вирионов икосаэдрической симметрии, и, действительно, имеются веские причины в пользу того, что такая симметрия для вирионов гриппа маловероятна. Хотя и имеются другие примеры вирионов с икосаэдрической симметрией, которые могут существовать либо в виде длинных трубчатых структур, либо в виде икосаэдров, сферические вирионы гриппа имеют размеры, лежащие в широких пределах, а до сих пор нет прецедента, когда идентичные субъединицы образовали бы икосаэдрические календы с непрерывным набором размеров. Большинство наблюдаемых вирионов не имеет контуров, характерных для икосаэдрической симметрии, а наблюдаемые иногда угловатые очертания могут быть результатом деформации. Таким образом, для убедительного доказательства наличия у вирусной оболочки икосаэдрической симметрии требуются дополнительные аргументы.

Б. ПОВЕРХНОСТНЫЕ «ШИПЫ»

Поскольку вопросу о строении гемагглютинина и нейраминидазы будут посвящены гл. 3 и 10, здесь мы коротко коснемся этой проблемы.

1. Гемагглютинин

Как уже было указано, поверхностный «шип» гемагглютинина формируется из субъединиц гликопротеида с молекулярной массой приблизительно 75 000—80 000. Гликопротеид может находиться либо в виде одной полипептидной цепи II А, либо в виде комплекса продуктов ее протеолитического расщепления — HAi и НА2, которые продолжают удерживаться рядом друг с другом за счет наличия между ними дисульфидиых мостиков.

В исследованиях с использованием для разрушения вирионов эфира было показано, что из вируса может быть изолирован компонент, обладающий гемагглютинирующей активностью (Hoyle, 1952; Scharer, Zillig, 1954) и что при негативном контрастировании субъединиц гемагглютинина наблюдаются розеткоподобные структуры диаметром 30—40 нм, в которых частицы, идентичные присутствующим на поверхности вириона, располагаются радиально (Hoyle et al., 1961; Choppin, Stoeckenius, 1964). Laver и Valentine (1969) изолировали поверхностные «шипы», используя штамм, в котором гемагглютинин был устойчив к обработке додецилсульфатом натрия (SDS). Эти структуры имели диаметр около 4 нм и длину 14 нм. После удаления SDS структуры агрегировали идентичными концами, что указывает на гидрофобный характер этих областей поверхностных «шипов». Основываясь на размерах «шипов» гемагглютинина, определенных по электронно-микроскопическим снимкам, Laver и Valentine (1969) установили, что их молекулярная масса должна быть не менее 150 000. После того как стало ясно, что поверхностные «шипы» формируются из белковых молекул с молекулярной массой 75 000—80 000, было предположено, что две такие белковые молекулы (представляющие собой комплекс HAi и НА2) образуют «шип» гемагглютинина (Laver, 1971; Stanley, Haslam, 1971; Skehel, Schild, 1971). Позднее с помощью седиментационных методов (Brand, Skehel, 1972) было выяснено, что молекулярная масса «шипов» гемагглютинина равна 215 000, а их изучение с помощью метода электронной микроскопии показало, что они имеют треугольную форму, если смотреть в торец выступа (Laver, 1973; Griffith, 1975). В связи с этим был сделан вывод, что каждый «шип» гемагглютинина является тримером, состоящим из трех НА-полипептидов, каждый из которых является комплексом HAi + + НА2.

Гидрофобное свойство основания «шипа» гемагглютинина указывает на то, что именно эта область определяет его связь с вирусной мембраной (Laver, Valentine, 1969). Впоследствие было показано, что после обработки протеазой можно получить вирусные частицы, сохраняющие в своем составе полипептид НА2, но не обладающие гемагглютинирующей активностью и не содержащие различимых поверхностных «шипов» (Compans et al., 1970а). Это доказывает, что именно НА2— часть молекулы НА —отвечает за связь «шипа» с поверхностью вириона. Это согласуется с выводом Brand и Skehel (1972) о том, что «шипы» гемагглютинина могут быть солю-билизированы с помощью протеазы и при этом они теряют только небольшую часть лолипептида НА2. Такие частицы неспособны ж агрегации и могут быть кристаллизованы. Таким образом, приведенные факты ясно показали, что НА2 — часть гликопротеида НА —содержит гидрофобную область и отвечает за связь «шипа» гемагглютинина с мембраной. Детали механизма взаимодействия «шипа» с вирусной мембраной еще не совсем ясны. Однако уже сейчас можно утверждать, что, как будет подробно обсуждено далее, липиды вирусной мембраны сгруппированы в двойной слой и лишь небольшая часть «шипа» гемагглютинина проникает в этот слой. Именно поэтому небольшой по молекулярной массе пептид, содержащий большое число гидрофобных аминокислотных остатков, вероятно, остается в составе вирусной частицы после ее обработки протеазой (Compans, неопублико-занные данные). Протеаза лишь незначительно изменяет структуру липидного двойного слоя и, вероятно, эта структура стабилизируется в большей степени липид-липидным взаимодействием, чем связью между глшдапротеидными и ляпид-ными молекулами (Compans et al., 1970a; Landsberger et al 1971, 1973).

2. Нейраминидаза

В работе, в которой из различных штаммов вируса гриппа изолировали поверхностные «шипы» гемагглютинина (La-ver, Valentine, 1969), кроме того, выделяли структуры отличной морфологии, обладающие нейраминидазной активностью. Это наблюдение подтвердило мнение о том, что на поверхности вирионов гриппа имеются два различных типа «шипов». «Шипы» нейраминидазы имели продолговатую головку размером приблизительно 5x8,5 нм, присоединенную к нитевидной ножке длиной около 10 нм, на конце которой имелось небольшое утолщение диаметром 4 нм. В отсутствие детергента эти структуры слипались своими концами, образуя розетки. Следовательно, в их составе также имеются гидрофобные области. Хотя из вирионов с помощью детергентов и изолировали два различных типа поверхностных структур, их не удалось до настоящего времени различить на поверхности необработанных вирусных частиц, что, вероятно, объясняется их близким расположением в вирусной оболочке. Это может быть также обусловлено трудностью идентификации «шипов» нейраминидазы на фоне большого числа поверхностных структур гемагглютинина.

Как было уже оказано, молекулярная масса мономерной субъединицы NA лежит в пределах 55000—65 000. Имеются биохимические и морфологические аргументы в пользу того,

что нейраминидазный «шип» представляет сооои тетрамер с молекулярной массой 200 000—250 000 (Kandal, Eckert,. 1972; Bucher, Kilbourne, 1972; Lazdins et al., 1972; Wrigley i'.t al.. 1973). Электронно-микроскопические .исследования нейраминидазы после ее обработки трипсином выявили структуры, состоящие из четырех сфер диаметром 4 нм, сгруппированных в квадратную компланарную структуру (Wrigley et al., 1973). Такого рода тетрамер на виде сбоку соответствует вытянутой головке нейраминидазного «шипа»,, изолированного с помощью детергента. С помощью обработки трипсином разрушалась стеблеобразная нить субъединицы нейраминидазы.

Так же как в случае гемагглютинина, механизм присоединения нейраминидазы к вирусной мембране не совсем ясен. Вероятно, подобно «шипу» гемагглютинина, «шип» нейраминидазы имеет гидрофобную область, которая вовлечена в это взаимодействие и при определенных условиях подвержена действию протеазы.

В. ДВОЙНОЙ ЛИПИДНЫЙ СЛОЙ

В связи с тем что вирионы гриппа образуются в процессе отпочкования от плазменных мембран, причем вирусные частицы получают свои липиды именно от этих клеточных ор-ганелл, вполне вероятно, что организация липидов в вирусной оболочке зеркально отображает организацию липидного слоя плазменных мембран клетки. Имеющиеся в настоящее время данные указывают на то, что -вирусные липиды организованы в структуру, представляющую собой двойной ли-пидный слой. Исследования, проведенные с помощью метода электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) при использовании спин-меченных производных стеариновых кислот, показали, что в вирионах гриппа имеется именно двухслойная структура липидов (Landsberger et al., 1971, 1973). Градиент подвижности спиновых зондов, характерный для структур тина двойного слоя (McConnell, McFarland, 1972), наблюдался также и в случае спин-меченных вирионов гриппа. Если 'спиновый зонд, содержащий нитроксидное ядро, был прикреплен близко к полярному концу молекулы стеариновой кислоты, он находился в вирионе в области с относительно высокой степенью упорядоченности липидного слоя. Если же эта группа находилась относительно далеко от .карбоксильного конца молекулы стеариновой кислоты, то ее окружение более приближалось к жидкофазному состоянию. На 9 приведены спектры ЭПР вирионов гриппа с включенными в них спин-меченными стеариновыми кислотами и спектры эритроцитов человека, полученные в аналогичных условиях; в случае обеих мембран спектры очень сходны.

На основании экспериментов, проведенных с соединением, которым метили поверхностные структуры, был сделан вывод, что структура фосфолипидов поверхностных мембран -клетки асимметрична, причем холинсодержащие молекулы в основ-н:>м сосредоточены во внешней части двойного слоя, в то вре-VR как аминофосфолипиды расположены в его внутренней части (Bretscher, 1972, 1973). Свойствен ли такой тип структуры вирусной оболочке, пока не ясно, однако существующие г настоящее время данные об организации липидной оболоч-УМ ларагриппозных вирусов (Klenk, Choppin, 1969, 1970а) не согласуются с утверждением о том, что фосфатидилэтанол-iMira и фосфатидилсерин всегда расположены на внутренней части двойного липидного слоя, а фосфатидилхолин — на его внешней части. Отношение количества аэдинофосфолипидов к количеству холинсодержащих фосфолипидов варьирует в ши-z эких пределах для вирусов, выращенных на «летках различных типов, и это отношение коррелирует с аналогичной величиной для клеток-хозяев. В связи с тем, что все исследованные вирусы парагриппа содержали в 'поверхностном слое одинаковые белки, утверждение о возможном вытеснении ли-пидов из части 'биелоя за счет внедрения туда белковых молекул (Bretscher, 1973), не согласуется с наличием различий з фосфолипидном составе. В связи с этим возможно, что разное соотношение липидов отражает различное распределение индивидуальных фосфолипидных молекул во внутренней и внешней частях двойного липидного слоя.

В ультратонких срезах вирион гриппа имеет характерную мембранную структуру, морфологически сходную со структу-эой поверхностной клеточной мембраны «летки-хозяина (см. 6—8). Внешний вид вирусной оболочки зависит как от вида клеток, на которых вирус выращивали, так и от вида электронно-микроскопического контрастирования (Compans, Dimmock, 1969). Если на поверхности клетки удается обнаружить элементарную мембрану, в вирусной частице наблюдается мембрана аналогичного вида. Внешний слой вирусной мембраны покрыт поверхностными «шипами», а на внутренней поверхности был обнаружен дополнительный слой с высокой электронной плотностью, который не обнаруживается в нормальной клеточной мембране. Как будет показано далее, вполне вероятно, что этот слой соответствует локализации на внутренней поверхности двойного липидного слоя молекул М-белка.

Распределение контрастного вещества после фиксации мембран осмием, вероятно, отражает локализацию амннофос-фолипидов (Bretscher, 1973). При фиксации и контрастировании осмием отчетливо окрашиваются как внутренний, так и внешний слои листка элементарной мем-браны клеток MDBK, в то время как в клетках BHK21-F или клетках куриных фибробластов окрашивается только цитоплазматический слой. Окраска внешнего слоя вирионов гриппа, выращенных на «летках MDBK, коррелирует с более высоким содержанием аминофоофолипидов в этих клетках (Klenk, Choppin, 1970а) и возможно, что в этих условиях аминофосф'Олипиды распределены на обеих сторонах двойного слоя, в то время ка,к они отсутствуют на внутренней поверхности липидного слоя клеток BHK21-F.

В вмрионах гриппа обнаруживаются также гликолипиды, причем их локализацию на внешней 'поверхности двойного липидного слоя продемонстрировали агглютинацией вирионов с помощью специфических лектинов (Klenk et al., 1972а).

В интактных вирионах гликолипиды закрыты, но становятся доступными для лектинов после удаления поверхностных «шипов» с ломощью обработки протеазой.

Г. МЕМБРАННЫЙ БЕЛОК

Как уже было указано, при изучении с помощью электронного микроскопа окрашенных ультратонких срезов вирионов гриппа на внутренней поверхности вирусной оболочки наблюдается дополнительный слой с высокой электронной плотностью (см. 7 и 8). Этот слой не обнаруживается в нормальных цитсшлазматических мембранах (Apostolov, Flewett, 1969; Kendal et al., 1969; Compans, Dimmock, 1969; Bachi et al., 1969; Apostolov et al., 1970). В настоящее время существует несколько независимых групп аргументов в пользу того, что этот слой образован самым низкомолекулярным и наиболее широко представленным белком вириона, называемым мембранным, или матриксным, белком (М-белок). Доказательства эти следующие: 1) гликопротеиновые «шипы» могут быть удалены с помощью протеолитических ферментов при сохранении М-белка и слоя с высокой электронной плотностью (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970, 1972; Kendal et al., 1969). После такой обработки кроме М-белка в составе вириона^, остаются только белок NP и Р-белки, и ни один из них не может быть ответствен за наличие слоя с высокой электронной плотностью. Несколько адолекул Р-белков, присутствующих в вирионе, не могут образовать такой слой, а белок NP находится во внутренней части вириона, входя в состав спирального нуклеокапсида; 2) расчеты показывают, что только М-белок присутствует в вирионе в (количестве, достаточном для формирования непрерывной оболочки толщиной 4—6 нм под двойным лиошдньш слоем (Compans et al., 1972; Schulze, 1972); 3) после экстракции липидов из фиксированных, лишенных поверхностных «шипов» вирионов

остается оболочка, которая может 'быть образована только М-белком (Schulze, 1972); 4) эксперименты с йодированием хлорамином Т показали, что М-белок, хотя и не расположен па поверхности вириона, является внешним по отношению к пуклеонротеиду (Stanley, Haslam, 1971); 5) исследования, .проведенные с помощью метода спектрофлуорометрии, показали возможность переноса энергии с М-белка на флюоресцентный зонд, внедренный в липидный бислой вириона (Lenard et al., 1974).

Приведенные аргументы указывают на тесную связь М-белка с внутренней частью мембраны; тем не менее этот белок, вероятно, не пронизывает насквозь двойной липидный слой и не выступает на внешнюю сторону мембраны. Это доказывается отсутствием действия на этот белок протеолити-ческих ферментов (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970; Klenk et al., 1972a), недоступностью М-'белка для веществ, специфически реагирующих с поверхностными белками (Stanley, Ha'slam, 1971; Rifkin et al., 1972), и невозможностью обнаружить внутримембранные частицы при изучении мембран вируса гриппа с помощью метода сколов при замораживании (Bachi et al., 1969).

Из самого пространственного расположения М-белка, образующего каркас двойного липидного слоя, и того факта, что гликопротеиновые поверхностные «шипы» не играют основной роли в поддержании формы и целостности вирусной мембраны, можно сделать следующий вывод: вероятно, М-белок в вирусной оболочке играет основную структурирующую роль. Кроме того, этот белок обладает и другими функциями, которые вытекают из его расположения и свойств. Во время сборки оболочечных вирусов нуклеокапсид располагается под тем участком клеточной мембраны, который содержит вирусные поверхностные белки, что указывает на существование «узнавания» нуклеокапсидом этого участка мембраны.

Далее, во время сборки и отпочковывания вирусная оболоч-. ка формируется из клеточной мембраны, тем не менее в вирионе не содержится белков клетки-хозяина, что является дополнительным аргументом в пользу возможности миграции белков в плоскости клеточной мембраны. Эти факты наводят на мысль, что вирус имеет механизм для поддержания локализации своих компонентов вблизи той части клеточной мембраны, которая содержит вирусные белки и из которой удалены клеточные белки. Как уже предполагалось, наиболее вероятным кандидатом, осуществляющим как «узнавание» места локализации 'вирусного нуклеокаисида, так и поддержание вблизи мембраны вирусных компонентов, является М-белок (Choppin et al., 1972; Choppin, Compans, 1975; Compans, Choppin, 1975; Choppin, 1975).

НУКЛЕОКАПСИД

Внутренняя структура вирионов гриппа при негативном контрастировании препаратов проявляется достаточно редко, поэтому основная информация о структуре внутреннего ри-бо-нуклеоиротеида (РНП) была получена гари изучении изолированных РНП и вирусных частиц с помощью ультратонких срезов. Существует общее мнение, что РНП представлен в вир'Ионе в виде отдельных фрагментов, каждый из которых состоит из одной молекулы РНК, большого числа одинаковых молекул полипептада NP и, вероятно, из одной или нескольких молекул полимер-азы Р.

Ри'бонуклеоп'ротеид может быть выделен из вирионов в градиенте плотности после их разрушения с помощью обработки такими детергентами, как NP40 или эфир. Если структуры, полученные после такого выделения, исследовать с помощью негативного контрастирования уранилацетатом или фоефовольфрамовой кислотой (10 и 11), можно наблюдать нити диаметром 10—15 нм, длина которых варьирует в пределах 30—110 нм (Pons et al., 1969; Schulze et al., 1970; Corapans et al., 1972). Нити иногда имеют петли на одном из концов и хорошо различимые повторяющиеся следы глубокой и мелкой бороздок, свидетельствующих о том, что эта структура образована нитью, закрученной и свернутой в двойную спираль. На 12 [показана гипотетическая модель РНП. Препарат РНП можно фракционировать на несколько классов различающихся до размерам молекул с помощью скоростной седиментации, что отражает наличие в суммарной фракции фрагментов РНК с различной молекулярной массой (,Duesberg, 1969; Pon's, 1971). Фракции после разделения содержат структуры одинакового диаметра и существенно различной длины (Compans et al., 1972). Распределение по длине изолированных РНП было изучено в опытах с использованием в качестве контрастирующего вещества уранилацетата, который преимущественно связывается с нуклеиновой кислотой (см. 11). Наиболее быстро седимен-тирующий РНП имеет максимум на кривой распределения фрагментов по длине при 90—ПО нм, РНП со средними размерами — при 60—90 нм и самый короткий РНП — при 30— 50 нм. Эти значения длины РНП могут быть окоррелированы с молекулярной массой нуклеиновых кислот, входящих в состав РНП различных классов. Так, наибольший по размерам РНП содержит РНК с самой 'большой молекулярной массой— 106 (см. раздел II этой главы и гл. 6). В РНП приблизительно 10—12% массы приходится на РНК, а остальное — на белок, который практически полностью представлен еубъ-едивицами полипептида NP (Ponse et al., 1969; Krug, 1971). Используя эти данные, можно рассчитывать, что на 100 нм

нити РНП приходится около 150 субъединиц белка с молекулярной массой 60 000, т. е. один виток спирали РНП содержит приблизительно 12 субъединиц этого 'белка, и на одну белковую субъединицу приходится 20 нуклеотидов (Compans et al., 1972).

Исследование вирионов гриппа с помощью метода ультратонких срезов подтвердило ту точку зрения, что вирусный РНП представляет собой внутри 'вирусной частицы набор коротких фрагментов РНП (Compans, Dimmock, 1969; Bactu et al., 1969; Compan's et al., 1970b; Shulze, 1973). Вирионы в момент отпочковывания обычно слегка вытянуты и внутриви-русные нити РНП располагаются параллельно длинной оси частицы (Compans, Dimmock, 1969). Негативное контрастирование с помощью уранилацетата вирусных частиц, лишенных поверхностных «шипов» при обработке протеазой, выявило наличие большого количества внутривирусных нитей, морфология которых совпадала с морфологией РНП, изолированного из вирионов с помощью обработки детергентом (Schulze, 1973). Таким образам, различные методические приемы, позволяющие наблюдать внутреннюю структуру большего числа вирусных частиц популяции, обнаруживают, что РНП находится в вирусной частице во фрагментированном состоянии. При негативном контрастировании в некоторых вирионах наблюдаются большие бухтообразные структуры (Apostolov, Flewett, 1965; Almeida, Waterson, 1970; Schulze et al., 1970). Предполагалось, что эти структуры представляют собой «ин-тактные» нуклеокапсиды вирионов гриппа и что РНП, изолируемый из вирусных частиц, является продуктом фрагментации этих структур (Almeida, Waterson, 1970). Однако наличие петель на одном из концов изолированной нити нук-леО'Протеида, а также тот факт, что длины нитей сгруппированы в дискретные группы (Compans et al., 1972), .подтверждают точку зрения, согласно которой полученные при изоляции из (вирионов нити РНП не являются прямыми продуктами фрагментации больших по размерам структур. Кроме того, как уже было описано, при исследовании ультратонких срезов вирусных частиц, когда разрешается внутренняя структура большинства вирионов, 'большие бухтообразные структуры обнаруживаются очень редко, а иногда и вообще не наблюдаются. В.некоторых случаях подобные структуры находят в инфицированных клетках, однако еще нет доказательств, что они имеют какое-либо отношение ,к вирусным РНП. Наличие связи этих бухтообразных структур с вирио-нами будет доказано только после их изоляции в чистом виде и определения их химического состава.

На основании высокой частоты рекомбинаций, характерной для вирусов гриппа (см. гл. 7), предполагалось, чтс» фрагменты РНП включаются в вирусную частицу из внутриклеточного резервуара случайно (Hirst, 1962). Хотя может быть строго доказано, что в результате такого случайного процесса лишь в редких случаях будут формироваться ви-рионы, содержащие все фрагменты генома, необходимые для осуществления инфекционное, тем не (менее относительное количество инфекционных вирионов в 'популяции вируса значительно увеличится, если вирионы будут содержать избыточное количество фрагментов РНК (Compans et al., 1970b). Доказательство случайного включения фралментов РНК в вирионы гриппа основывается на наблюдении Hirst и Pons (1973), заключающемся в том, что агрегаты вирионов гриппа, как обнаруживаемые при нормальных условиях, так и образуемые искусственно с помощью нуклеогистона, обладают повышенной инфекционностью. Эти результаты указывают на наличие комплементации двух или большего числа вирусных частиц, каждая из которых в отдельности не содержит •полного набора 'фрагментов РНК, необходимого для осуществления инфекционности.

Рибонуклеопротеид вируса гриппа по некоторым своим свойствам отличается от спирального нуклеокапсида пара-миксовируеов. РНК нуклеопротеида вируса гриппа в отличие от РНК в составе нуклеокапсида парамиксовирусов (Compans, Choppin, 1968) чувствительна к действию рибо-нуклеазы (Duesberg, 1969; Kingsbury, Webster, 1969; Pons. et al., 1969). Обработка РНП вируса гриппа поливинилсуль-фатом высвобождает РНК и образует .комплекс субъединиц .белка с поливинилсульфатом, структура которого очень сход-

на со структурой РНП (Pons et al., 1969; Goldstein, Pons, 1970). Нуклеокалсиды парамиксовирусов нечувствительны к такой обработке (Goldstein, Pons, 1970). Таким образом, механизмы взаимодействия РНК — белок для этих двух структур существенно различны, причем РНК вируса гриппа, входящая в состав РНП, вероятно, более доступна внешним •воздействиям.

Рибонуклеопротеид вируса гриппа чувствителен также к действию протеазы (Pons et al., 1969). При низких концентрациях проназы РНП не изменяет свои седиментационные параметры, однако при предварительной обработке препарата рибонуклеазой проказа приводит к деградации РНП (Duesberg, 1969). Следовательно проназа может расщеплять связи между субъединицами белка, не воздействуя на структуры, цельность которых определяется взаимодействием белковых субъединиц с молекулами РНК.

С РНП, изолированным из вирионов гриппа (Bishop, 1972) или из инфицированных им клеток (Caliguiri, Compans, 1974), вероятно, связаны минорные полипептиды Р. Поскольку в каждом фрагменте РНП может содержаться лишь несколько молекул этих полипштидов, кажется маловероятным, что они играют какую-либо роль в поддержании структуры РНП. Точная локализация молекул полипептидов Р пока неизвестна. Вероятно, они присоединяются к РНП менее прочно, чем молекулы полипептида NP, поскольку они могут удаляться во время очистки (Schulze, 1973). Минорные полипептиды Р могут входить в состав вирусной транскрип-тазы (Bishop et al., 1972) или 'быть инициаторными полипеп-тидами для «одевания» РНК белком РНП.

IV. СБОРКА ВИРИОНОВ

Сборка вирионов гриппа (см. гл. 8) осуществляется во время их отпочковывания от плазменной мембраны. Этот процесс будет рассмотрен в гл. 8 и ранее подробно обсуждался в литературе в отношении не только вирусов гриппа, но и других вирусов, 'формирующихся путем отпочковывания от клеточных мембран (Compans, Choppin, 1971, 1973, 1975; Choppin et al., 1971, 1972; Lenard, Compans, 1974; Compans et al., 1974; Klenk, 1973, 1974; Choppin, Compans, 1975). В связи с этим здесь мы лишь кратко суммируем данные о сборке вирионов гриппа, имеющиеся в настоящее время. РНП вируса гриппа синтезируется в цитоплазме и располагается под теми областями клеточной мембраны, которые содержат вирусные поверхностные белки. Затем вирион формируется за счет процессов отпочковывания и отделения от плазменной мембраны. Во время процесса отпочковывания элементарная мембрана вновь образующегося вириона соявляет одно целое с аналогичной мембраной, локализованной на поверхности хозяйской клетки (Compans, Dimmock, l%9; Bachi et al., 1969). Гликопротеиды, вероятно, сначала .пч'оциируются с внутриклеточными мембранами, а затем июдходят к плазменной мембране (Compans, 1973a, b; Stan-Icy et al., 1973; Klenk et al., 1974; Hay, 1974), что можно обнаружить с помощью специфической адсорбции эритроцитов м.ч плазменных мембранах 'Инфицированных клеток (Сот-p.-ins, iDimmock, 1969). Затем, вероятно, на внутреннюю по-iH'pxHocTb плазменной мембраны адсорбируется М-белок, формируя четко различимый слой с высокой электронной плотностью (Apostolov, Flewett, 1969; Compans, Dimmock, 1969; Bachi et al., 1969). Гликопротеиды и М-белок обнаруживаются в ассоциированном с плазменными мембранами виде при введении короткой пульсовой метки (Lazarowitz et al., 1!)71). Наличие М-белка, по-видимому, способствует образованию «посадочных мест» для РНП, затем инкорпорирующегося в вирионы при их отпочковании. Изменение формы плазменной мембраны, которое сопутствует отпочкованию, можно объяснить асимметричным растяжением внешней части двойного липидного слоя за счет внедрения в него поверхностных белков по механизму, сходному с механизмом, предложенным Sheetz и Singer (1974) для действия амфипатических .лекарств, индуцирующих изменение формы клеточных мембран. Процесс сборки вирионов заканчивается формированием целостных вирусных и клеточных мембран путем их «сплавления» в областях, где произошло отпочкование вирусных частиц. В результате этого процесса формируются либо сферические, либо филаментозные вирионы. Механизм, с помощью которого вирусный геном контролирует морфологию вирусных частиц, в настоящее время еще не выяснен.

V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. МОДЕЛЬ ВИРИОНА ГРИППА

На 12 приведена схематическая диаграмма вириона гриппа, основанная на известных в настоящее время сведениях об его структуре. Эта (модель отражает как хорошо установленные структурные данные, так и данные, которые еще требуют своего подтверждения. Как уже указывалось, в настоящее время имеют место альтернативные объяснения некоторых особенностей строения вириона гриппа. Не все детали структуры вирусной частицы нашли отражение на приведенной диаграм!ме (например, на ней не показано оли-гомерное строение поверхностных «шипов»). Эти детали обсуждаются в данной главе, а также в гл. 3 и 10. Существующие в настоящее время данные позволяют заключить, что информация о синтезе всех вирусных белков содержится в

вирусном геноме, а состав липидов и последовательность сахарных остатков в углеводных цепочках, присоединенных ,к гликоиротеидам или гликолипидам вирусной мембраны, определяются в большой степени, если не полностью, клеткой-хозяином. Вирионы могут (представлять собой либо сферические частицы диаметром 80—120 нм, либо филаментозные образования того же диаметра с различной длиной.

Поверхность вириона покрыта выступами или шипами. Эти шипы представляют собой олигомерные структурные образования, сформированные из гликопротеидов, обладающих либо гемагглютинирующей (НА), либо нейраминидазной (NA) активностью. «Шип» 'гемагглютинина состоит из трех НА-полипелтидов с молекулярной массой приблизительно 80 000, которые организованы в палочкообразную структуру длиной примерно 14 нм. В определенных условиях полипеп-тид НА может расщепляться с помощью протеолнтических ферментов на два полипептида HAj и НА2, связанных друг с другом дисульфидными связями. Такое расщепление не является необходимым условием для правильной сборки вириона и для осуществления гемагглютинирующей активности. НА2 — часть полипептида НА — гидрофобна и содержит в своем составе область, непосредственно взаимодействующую с вирусной мембраной.

«Шип» нейрамидазы сформирован четырьмя полипептидами NA с молекулярной массой около 55 000. Полипептиды представляют собой образования с утолщениями на конце диаметрохМ около 4 нм, которые сформированы в планарные структуры, имеющие вытянутые боковые проекции. Эти утолщения присоединены к нитеобразным «хвостам» длиной около 8 нм, погруженным в вирусную мембрану. Детальный механизм прикрепления поверхностных «шипов» к вирусной мембране еще не выяснен. «Шипы» как гемагглютинина, так и нейраминидазы имеют гидрофобные основания, способные присоединиться к двойному липидному слою мембраны 'вирусной частицы (за счет гидрофобного взаимодействия. Тем не менее поверхностные «шипы», вероятно, не пронизывают липидный слой насквозь и не погружены в него на значительную глубину (однако неглубокое проникновение возможно). «Шипы» могут быть удалены из вирусной мембраны без нарушения ее целостности.

На внутренней стороне двойного липидного слоя находится слой,. сформированный негликозидированным М-белком с молекулярной массой около 25 000. Предполагается, что этот белок может осуществлять в вирусной оболочке основную структурную роль, стабилизируя ее и, вероятно, определяя ее форму. Кроме того, этот белок может играть важную роль лри сборке вирусных частиц, с одной стороны, являясь своего рода «посадочной площадкой» на клеточной мембра-

не для нуклеокапсида, ас другой— ограничивая ту часть 'плазменной мембраны, которая содержит исключительно ви-руеспецифические белки.

Внутри вирусной оболочки содержится несколько фрагментов нуклеокапсида. Они представляют собой двухспираль-пые структуры разной длины, образованные субъединицами ислка NP с молекулярной массой около 60 000 и содержащие различные отрезки фрагментированного однонитчатого l'HK-генома. Внутри вирусной оболочки, кроме того, локализованы белки Р с молекулярной массой приблизительно ПО 000 (вероятно, они ассоциированы с нуклеокалсидом еще неясным в настоящее время образом). Функция этих белков пока не выяснена, однако предполагается, что они осущест-кляют вирусную транскриптазную активность.



LITTÉRATURE

Ada GL, Gottschalk A. Biochem. J., 1956, v. 62, p. 686. Ada GL, Perry BT Aust. J. exp. Biol. Med. Soc, 1954, v. 32, p. 453. Ada GL, Perry В. Т., Abbot AJ Gen. Microbiol., 1958, v. 19, p. 23. Agrawal HO, Bruening G. Proc. Nat. Acad Sci. US, 1966

Almeida JD, Waterson APJ gen. Microbiol., 1967, v. 46, p. 107. Almeida JD, Waterson AP In: The Biology of Large RNA Viruses

(RD Barry and BWJ Mahy, eds.), New York, Acad. Press, 1970

Apostolov K., Flewett Т. Н. Virology, 1965, v. 26, p. 506. Apostolov K., Flewett Т. Н. J. gen. Virol., 1969, v. 4, p. 365. Apostolov K-, Flewett Т. Н., Kendall AP In: The Biology of Large RNA

Viruses (RD Barry and BWJ Mahy, eds.), New York, Acad. Press,

1970, p. 3—26. Archetti 1., Jamelo A., Steve-Bocciarelli D. Arch. ges. Virusforsch., 1967,

v. 20, p. 133. Bachi Т., Gerhard W., Lindenmann J., Muhlethaler KJ Virol., 1969

Barry RD, Bromley PA, Davies P. In: The Biology of Large RNA Viruses (RD Barry and BWJ Mahy, eds.), New York, Acad. Press,

1970, p. 279—300.

Bishop DHL, Obijeski JF, Simpson RWJ Virol., 1971, v. 8, p. 74. Bishop DHL, Roy P., Bean WJ, Jr., Simpson RWJ Virol., 1972

Blough HA Virology, 1963, v. 19, p. 349.

BloughH. AJ gen. Virol., 1971, v. 12, p. 317.

Blough HA Nature (London), 1974, v. 251, p. 333

Blough HA, Merlie J. Virology, 1970, v. 40, p. 685. Blough HA, Tiffany JM Advan. Lipid Res., 1973, v. 11, p. 267. Blough HA, Weinstein D. В., Lawson DEM, Kodicek E. Virology, 1967,

v. 33, p. 459. Brand С. М., Skehel JJ Nature (London), New Biol., 1972, v. 238,

p. 145.

Bretscher M. Nature (London), New Biol., 1972, v. 236, p. 11.

Bucher DJ, Kilbourne EDJ Virol., 1972, v. 10, p. 60.

Caliguiri LA, Compans RWJ Virol., 1974, v. 14, p. 191

Choppin PW Virology, 1963, v. 21, p. 278.
<< Précédente Suivant >>
= Passer au contenu du manuel =

Структура вируса гриппа

  1. Annexe 4 Grippe causée par le virus de la grippe A (H5N1) (grippe aviaire)
    La grippe aviaire est une infection virale hautement contagieuse qui peut toucher toutes les espèces d'oiseaux. Parmi les espèces domestiques, les dindes et les poulets sont les plus sensibles. Les oiseaux sauvages peuvent transmettre l'infection. Le réservoir naturel des virus de l'influenza aviaire (AIV) est la sauvagine, qui est le plus souvent responsable de l'introduction de l'infection dans les ménages. L'étiologie. AHP appartient à
  2. La culture des virus de la grippe humaine en laboratoire, le cercle d'hôtes parmi les animaux de laboratoire et l'isolement du virus du matériel clinique
    B.R.DAUDLE et G.S. SCHILD aux virus de la grippe (Schafer, 1955). En 1931, Shope passa la grippe porcine «classique» en administrant par voie intranasale un filtrat de sécrétions respiratoires. Premières données sur
  3. Protéines du virus de la grippe biologiquement actives. Activité de la transcriptase dans les cellules grippales et les virions
    RV OIMPSON et VD BIN (RW SIMPSON, WJ BEAN, JR.) I. INTRODUCTION Ce chapitre «est consacré à une section relativement nouvelle de la biologie du virus de la grippe, et donc la plupart des informations sont fragmentées dans sa composition de si un grand nombre de problèmes non résolus. La principale déclaration sur laquelle repose ce chapitre est que les mycovirus sont des virus génomiques négatifs.
  4. Kilburn ED. Virus grippaux et grippe (1978), 1978
    Le livre est consacré à une revue d'une variété de virus grippaux, leur culture, leur biochimie et leurs caractéristiques moléculaires. Contenu: Grippe et virus grippaux. La structure du virus de la grippe. Protéines du virus de la grippe biologiquement actives. Hémagglutinine. Protéines du virus de la grippe biologiquement actives. Neuraminidase. Activité de transcriptase dans les cellules et les virions de la grippe. Virus Ribonucleic Acids
  5. Virus de la grippe et grippe
    E. D. KILBOURNE I. INTRODUCTION. INFLUENZA - UNE MALADIE AUX SYMPTOMATIQUES INCHANGEABLES, CAUSÉE PAR UN VIRUS CHANGEABLE L'énorme intérêt suscité par la virologie moderne pour la grippe et les virus responsables de son apparition nécessite une explication, étant donné la nature ordinaire des symptômes de cette infection respiratoire, généralement très légère,
  6. Réplication du virus de la grippe
    K. SHOLTISSEK et H.-D. KLENK (SN. SCHOLTISSEK, H.-D. KLENK) I. INTRODUCTION Il existe un certain nombre d'études sur le problème de la réplication du virus de la grippe. La littérature jusqu'en 1968 est résumée dans des articles de Hoyle (1968) 'et Scholtissek (1969); les travaux ultérieurs sont des revues de White (1973), ainsi que Compans et Choppin (1974). La plupart des données sur la réplication obtenues dans l'étude du virus de la grippe de type A. Essentiel
  7. Variabilité antigénique du virus de la grippe
    RG WEBSTER et WG LEIVER i (RG WEBSTER et WG LAYER) I. INTRODUCTION Le virus de la grippe de type A1 est unique parmi les agents pathogènes des maladies infectieuses humaines en raison de sa capacité à modifier sa propre structure antigénique au point que l'immunité spécifique acquise la réponse "et l'infection par une souche est très faible ou ne protège pas contre la suivante
  8. Génétique du virus de la grippe
    A. SUGIURA I. INTRODUCTION. REVUE HISTORIQUE Ce chapitre n'est pas écrit pour donner un aperçu de toute la littérature relative à l'étude de la génétique du virus de la grippe. Cela se fait plus en détail dans les revues de Kjlbourne (1963) et Hoyle (1968). J'ai essayé de tracer, en essayant d'adhérer à l'ordre chronologique, uniquement pour les données qui ont directement conduit à des concepts importants et
  9. Рибонуклеиновые кислоты вирусов гриппа
    М. В. ЛОНС (М. W. PONS) I. ВВЕДЕНИЕ Вирус гриппа имеет уникальный по сравнению с другими вирусами животных спектр биологических свойств. Он обладает способностью .к множественной реактивации (Hoyle, Liu, 1951), образованию неполных вирусных частиц (von Magnus, 1954), чувствителен к антиномицину D (Barry et al., 1962), его нуклеиновая кислота неинфекционна -и он обладает способностью к
  10. Protéines du virus de la grippe biologiquement actives. Hémagglutinine
    I. T. SCHULZE (I. T. SCHULZE) I. INTRODUCTION Le fait que les virus de la grippe ont la capacité d'agglutiner les globules rouges a joué un rôle important dans le développement de nos idées sur ces particules infectieuses. L'hémagglutination s'est révélée être une méthode extrêmement pratique pour identifier, purifier et déterminer la concentration de virus. De plus, depuis (le moment de la découverte du phénomène d'hémagglutinacip il y a 35 ans
  11. Protéines du virus de la grippe biologiquement actives. Neuraminidase
    D. BOOKER et P. PALEYSE I. BUCHER I. INTRODUCTION L'existence de la neuraminidase a été suggérée pour la première fois dans le travail désormais classique de Hirst (1942). Il a constaté que si les globules rouges agglutinaient en présence du virus de la grippe désagglutiné, alors lorsqu'un nouveau virus leur était ajouté, ils ne pouvaient à nouveau pas s'agglutiner. Cependant, le virus élué ne
  12. Тема: Структура вирусов
    Принципы структурной организации вирусов. Вирион и его компоненты. Нуклеиновая кислота, капсид, капсомеры, суперкапсидная оболочка, пепломеры. Типы симметрии
  13. Pays avec des cas humains de grippe aviaire et plan d'action mondial de l'OMS contre la grippe
    À ce jour, des cas humains ont été signalés dans sept pays, dont la plupart se trouvent en Asie: Vietnam, Indonésie, Iraq, Cambodge, Chine, Thaïlande et Turquie. Chez les premiers patients enregistrés au Vietnam, les symptômes de la maladie sont apparus en décembre 2003 lors de la flambée actuelle, et l'infection H5N1 a été confirmée le 11 janvier 2004. Rapports de Thaïlande
Portail médical "MedguideBook" © 2014-2019
info@medicine-guidebook.com